人脯氨酸羟化酶2 (PHD2) ELISA试剂盒CS-M10465_上海莼试生物技术有限公司

产品详情

一、概述：

商品属性：

检测范围:	0.156-10ng/ml	反应性	Human
灵敏度:	0.094ng/ml	规格	48T/96T
货号	CS-M10465	存储条件	2-8°C
种属	Human	用途	仅供科研研究实验

商品介绍：

产品名称	Human PHD2(Prolyl hydroxylase domain-containing protein 2) ELISA Kit
别称	Egl nine homolog 1 ELISA Kit, Hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase 2 ELISA Kit, HIF-PH2, HIF-prolyl hydroxylase 2, HPH-2 ELISA Kit, Prolyl hydroxylase domain-containing protein 2 ELISA Kit, PHD2 ELISA Kit, SM-20 ELISA Kit, EGLN1 ELISA Kit, C1orf12 ELISA Kit
规格	48T/96T
种属	Human
样本类型	血清，血浆，细胞培养上清液，细胞裂解液或组织裂解液，其它生物液体样品
检测方法	Sandwich ELISA, Double Antibody
检测波长	OD450
反应时间	4小时
检测范围	0.156-10ng/ml
灵敏度	0.094ng/ml
存储条件	2-8°C (未开封时), 切勿冻存
产品特异性	特异性和 PHD2 结合，与其它类似物无明显交叉反应

试剂盒组件外所需器材和试剂：

1、酶标仪(波长450nm滤光片)

2、37°C恒温箱(不推荐使用细胞用CO2培养箱)

3、自动洗板机或多道移液器/5ml滴管(手工洗板用)

4、精密的单道(0.5-10μL, 5-50μL, 20-200μL, 200-1000μL)和多通道移液器(移液器使用前需校准)。

5、无菌的EP管及一次性吸头

6、吸水纸及加样槽

7、去离子水或蒸馏水

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 人脯氨酸羟化酶2 (PHD2) ELISA试剂盒标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤：

1、标准品的稀释：人脯氨酸羟化酶2 (PHD2) ELISA试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

160μg/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

80μg/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

40μg/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

20μg/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

10μg/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4、配液：将30倍（48T的20倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍（48T的20倍）稀释后备用

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7、温育：操作同3。

8、洗涤：操作同5。

9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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