人N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1 (ASAH1) ELISA试剂盒CS-M10132

产品详情

一、概述：

商品属性：

检测范围:	0.156-10ng/ml	反应性	Human
灵敏度:	0.094ng/ml	规格	48T/96T
货号	CS-M10132	存储条件	2-8°C
种属	Human	用途	仅供科研研究实验

商品介绍：

产品名称	Human ASAH1(Acid ceramidase)ELISA Kit
别称	Acid ceramidase ELISA Kit, AC ELISA Kit, ACDase ELISA Kit, Acid CDase ELISA Kit, Acylsphingosine deacylase ELISA Kit, N-acylethanolamine hydrolase ASAH1 ELISA Kit, N-acylsphingosine amidohydrolase ELISA Kit, Putative 32 kDa heart protein ELISA Kit, PHP32 ELISA Kit, Acid ceramidase subunit alpha ELISA Kit, Acid ceramidase subunit beta ELISA Kit, ASAH1 ELISA Kit, ASAH ELISA Kit
规格	48T/96T
种属	Human
样本类型	血清，血浆，细胞培养上清液，细胞裂解液或组织裂解液，其它生物液体样品
检测方法	Sandwich ELISA, Double Antibody
检测波长	OD450
反应时间	4小时
检测范围	0.156-10ng/ml
灵敏度	0.094ng/ml
存储条件	2-8°C (未开封时), 切勿冻存
产品特异性	特异性和 ASAH1 结合，与其它类似物无明显交叉反应

试剂盒组件外所需器材和试剂：

1、酶标仪(波长450nm滤光片)

2、37°C恒温箱(不推荐使用细胞用CO2培养箱)

3、自动洗板机或多道移液器/5ml滴管(手工洗板用)

4、精密的单道(0.5-10μL, 5-50μL, 20-200μL, 200-1000μL)和多通道移液器(移液器使用前需校准)。

5、无菌的EP管及一次性吸头

6、吸水纸及加样槽

7、去离子水或蒸馏水

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 人N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1 (ASAH1) ELISA试剂盒标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤：

1、标准品的稀释：人N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1 (ASAH1) ELISA试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

160μg/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

80μg/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

40μg/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

20μg/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

10μg/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4、配液：将30倍（48T的20倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍（48T的20倍）稀释后备用

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7、温育：操作同3。

8、洗涤：操作同5。

9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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