脱氢酶（DHA）活性的分光光度法测定是一种基于脱氢酶催化氧化还原反应的方法。通过检测反应过程中特定物质的吸光度变化，可以定量分析脱氢酶的活性。

原理

在细胞呼吸过程中，脱氢酶将底物氧化，释放的氢被受体 2,3,5 - 氯化三苯基四氮唑（TTC）接受。TTC 被还原为红色的三苯基甲臜（TF），TF 在 485nm 波长处有*大吸收峰。通过分光光度计测定 485nm 处的吸光值变化，可以计算出脱氢酶的活性。

样本处理

细菌、真菌：按比例将细胞与提取液混合，冰浴超声波破碎细胞，离心后取上清液待测。

组织：将组织与提取液匀浆，离心后取上清液。

液体样本：可直接检测。

操作步骤

预热分光光度计，调节波长至 485nm。

在比色皿中依次加入试剂和样本，混匀后测定吸光值。

根据吸光值变化计算脱氢酶活性。

计算方法

根据实验设计，选择合适的计算公式：

按蛋白浓度计算：DHAR (nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总 ×109÷(Cpr×V 样)÷T。

按样本质量计算：DHAR (nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总 ×109÷(W×V 样 ÷V 样总)÷T。

按细胞数量计算：DHAR (nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V 反总 ×109÷(细胞数量 ×V 样 ÷V 样总)÷T。

按液体体积计算：DHAR (nmol/min/mL) = △A÷ε÷d×V 反总 ×109÷V 样 ÷T。

注意事项

正式测定前进行预实验，确保样本吸光值在测量范围内。

反应需在避光条件下进行，避免 TTC 分解。

试剂需按要求保存，避免变质。