称取 0.5 克 MTT,溶于 100 毫升的磷酸盐缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中。
使用 0.22 μm 滤膜过滤除菌,以确保溶液的无菌状态。
保存于 4℃避光环境,两周内有效;如需长期保存,可分装后避光保存在 - 20℃,避免反复冻融。
MTT 溶液在细胞增殖检测中的使用步骤:
细胞准备与接种:将细胞接种于 96 孔板中,每孔加入 100 μL 细胞悬液,调整细胞密度至每孔 1000 - 10000 个细胞。
培养与处理:在 5% CO?、37℃条件下孵育,根据实验需求加入不同处理条件的药物,继续培养 16 - 48 小时。
MTT 呈色反应:每孔加入 10 - 20 μL MTT 溶液(终浓度 0.5 - 1 mg/mL),继续培养 2 - 4 小时。
溶解与比色:小心吸弃上清液,加入 150 μL 二甲基亚砜(DMSO),振荡 10 分钟使结晶溶解,然后用酶标仪在 490 - 570 nm 波长处测定吸光值。
注意事项:
MTT 溶液需现用现配,避免光照和污染。
操作过程中需注意避免吸走甲臜结晶,以免影响实验结果。
细胞接种浓度应根据细胞类型和实验目的进行调整,确保结果的准确性。