检测原理
MTT 是一种黄色的四氮唑盐,可被活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶还原为蓝紫色的 Formazan 结晶。活细胞数量越多,产生的 Formazan 结晶越多,颜色越深。通过特定溶剂溶解 Formazan 结晶后,使用酶标仪测定吸光度,吸光度越高,表明细胞增殖能力越强;吸光度越低,表明细胞毒性越大。
试剂盒组成
MTT 溶液:通常为 5mg/ml 的浓度,需避光保存。
Formazan 溶剂:用于溶解 Formazan 结晶,不同试剂盒成分可能不同。
使用说明书:提供详细的操作步骤和注意事项。
使用方法
细胞准备:将细胞培养至对数生长期,消化并制备成单细胞悬液,调整细胞密度后接种于 96 孔培养板。
培养与处理:根据实验需求,给予细胞适当的干预处理,继续培养。
MTT 孵育:弃去培养液,加入 MTT 溶液和新鲜培养液,孵育 4 小时。
溶解与测定:弃去培养液,加入 Formazan 溶剂,振荡溶解后,使用酶标仪测定吸光度。
注意事项
试剂保存与使用:MTT 溶液需避光保存,避免反复冻融;Formazan 溶剂若出现沉淀或凝固,需水浴孵育溶解后使用。
实验操作:注意避免细胞培养过程中的污染,操作时小心谨慎,避免人为损伤细胞。
检测条件:酶标仪的检测波长通常为 570nm,可根据试剂盒说明选择合适的波长。