主要特点和使用方法如下:
特点
高灵敏度:可检测低至 25 pg/mL 的 dsDNA,检测范围为 1 pg/μL 至 5 ng/μL。
高特异性:在等摩尔 RNA 存在下,对 dsDNA 具有特异性,不受单链 DNA、RNA、蛋白质和其他杂质的干扰。
强耐受性:能耐受高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖。
操作简便:只需将染料加入样品中,孵育 2-5 分钟后即可读数,适用于 96 孔板和 384 孔板,兼容大多数荧光酶标仪和荧光计。
使用方法
试剂准备:将 PicoGreen 试剂回温至室温,用 1×TE 缓冲液按 1:200 的比例稀释浓缩液,配制成工作溶液。稀释后的溶液应在数小时内使用,并注意避光保存。
标准曲线制备:
准备一系列已知浓度的 dsDNA 标准品,例如从 0.5 ng/mL 到 500 ng/mL 的浓度范围。
将标准品与 PicoGreen 工作溶液混合,避光孵育 2-5 分钟。
使用荧光计测量荧光强度,以荧光值对 DNA 浓度绘制标准曲线。
样品检测:
将样品与 PicoGreen 工作溶液混合,避光孵育 2-5 分钟。
测量荧光强度,并根据标准曲线计算样品的 DNA 浓度。
注意事项
试剂含有 DMSO,需小心操作。
尽管无明确证据表明其具有诱变性和毒性,但操作时仍需谨慎。
为确保准确性,应保持所有样品的检测时间一致,避免光漂白。