结合 / 清洗缓冲液的主要成分及作用:
咪唑:在结合缓冲液中,咪唑的浓度通常较低(如 10mM),以促进组氨酸标签蛋白与树脂的特异性结合。在清洗缓冲液中,咪唑的浓度可能会有所增加(如 20-40mM),以帮助去除非特异性结合的杂蛋白。
磷酸盐:维持缓冲液的 pH 值,确保在合适的酸碱度下进行蛋白结合和清洗。常见的磷酸盐浓度为 20-50mM。
氯化钠:增加离子强度,帮助破坏非特异性相互作用,提高清洗效果。通常使用的浓度范围为 0.15-1.0M。
使用结合 / 清洗缓冲液的注意事项:
咪唑浓度的选择:初次使用时建议进行咪唑浓度梯度实验,以确定*适浓度。
缓冲液的 pH 值:确保 pH 值在合适的范围内,以维持树脂的稳定性和蛋白的活性。
避免杂质干扰:在使用前过滤缓冲液,以去除可能影响纯化效果的杂质。
蛋白浓度的测定:结合后,可通过测量在 280nm 处的吸光度或使用蛋白浓度测定试剂盒来确定蛋白浓度。
树脂的再生:树脂可以反复使用,但需注意避免污染。若树脂污染严重,可进行在位清洗。