称取本品 49.4g，另称取 10g 甘油，加热煮沸完全溶解于 1000ml 蒸馏水中，分装后，121℃高压灭菌 15 分钟，备用。

挑取可疑菌落接种在 PDP 斜面上，培养 24 小时，观察斜面有无色素。

如果有色素，在试管内加氯仿 3.0～5.0mL，充分震摇，使绿脓菌素提取在氯仿中。待氯仿提取液呈现绿色时，加 1mol/L 盐酸约 1mL，震摇后静置片刻。如果上层盐酸溶液中呈现粉红至红色，则实验结果为阳性，否则为阴性。

实验操作需在通风橱中进行，因为氯仿极易挥发，有毒，具有刺激性，为可疑致癌物。

瓶盖不可拧得太紧，以免因氧气不足影响色素生成。

如果色素不明显，可适当延长培养时间至 48 小时。

绿脓菌素的产生受许多因素影响，如菌株差异及变异、培养条件等。培养基中琼脂、蛋白胨等均应事先测试，选用适宜品牌，试验时并用阳性菌株作对照试验。