订购信息：
| 产品名称 | 生长特性 | 价格 |
| 牛肾细胞（MDBK NBL-1） | 贴壁生长 | 电询 |
培养条件：
培养基：完全培养基为 RPMI - 1640（PM150110） + 10% FBS（164210 - 50） + 1% P/S（PB180120）。
培养环境：气相为空气 95%、CO₂ 5%，温度保持在 37℃。
产品描述：
名称相关：中文名称为 MDBK [NBL - 1]（牛肾细胞），英文名称是 MDBK [NBL - 1]，细胞简称 MDBK [NBL - 1]，别称有 MDBK (NBL - 1)、NBL - 1、Madin - Darby Bovine Kidney、Madin Darby Bovine Kidney 等。
起源信息：1957 年 2 月 18 日，由 S·H·Madin 和 N·B·Darby 从一只表观正常的成年牛肾脏建立。1973 年，这株细胞被牛病毒性痢疾病毒（BVDV）感染；1982 年，发现一株未被 BVDV 感染的细胞株，此细胞*初来自 ATCC 1967 年 7 月第 96 代的冻存管。供体为成年雄性牛，组织来源是正常肾细胞。
细胞特性：细胞形态呈上皮细胞样，为自发永生化细胞，生长特性是贴壁细胞，生物安全等级为 2 级。
传代方法
吸出原培养液。
加入 2ml 左右 PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出 PBS 丢弃。
加入 1ml 左右 0.25%胰蛋白酶溶液（含 EDTA），轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞。
放入培养箱消化，显微镜下看到细胞块中间的细胞明显变圆有间隙时可终止，全程不要拍打培养瓶。
加入 3ml 含血清的培养基终止消化，吹打细胞使之脱壁并在液体里反复吹打使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液。
收集细胞悬液离心，1200rpm/min 3 分钟，离心完吸出上清丢弃。
加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞即可，按比例（1:2 - 1:4）接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。消化时间约 2 - 3 分钟，换液频次为 2 - 3 次/周，倍增时间约 35 小时。
其他培养相关要点
培养基选择：除了上述的 RPMI - 1640 培养基，RPM1640 也是应用广泛的培养基之一，推荐悬浮细胞培养使用，主要针对淋巴细胞，也适合其他细胞；199、109 培养基成分齐全，培养效果较好；F10 培养基适合小鼠及人类二倍体细胞培养；McCoy’s 5A 培养基特别适合原代细胞及较难培养细胞的生长。
培养污染：细胞培养中*常见污染的是细菌、真菌和支原体污染。导致污染的原因可能有超净台未及时灭菌、器材或溶液未检测污染就使用、操作时不规范（如不点酒精灯、徒手操作等）、培养间仪器设备和物品未定期消毒等。
细胞冻存与复苏
细胞冻存
添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min。
用适量的冻存液（FBS:DMSO = 9:1）重悬细胞，并放置于冻存管中。
先将细胞冻存管放置于 - 20℃ 1.5h，然后将其移入 - 80℃ 过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入 - 80℃。
细胞复苏
从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min。
弃上清，沉淀用 5ml 完全培养基重悬，接种 25cm²培养瓶，于 37℃，5% CO₂细胞培养箱中培养。
第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
用途：可用于定量检测逆转录病毒的复制。
上海莼试生物技术有限公司
