HT22小鼠海马神经元细胞（复苏）CS-K20225X_上海莼试生物技术有限公司

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HT22小鼠海马神经元细胞（复苏）

贴壁生长

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培养基准备：

完全培养基配方：90%高糖DMEM + 10%胎牛血清（FBS）。

培养条件：37℃，5% CO2环境。

工具与材料

无菌操作台

37℃水浴锅

离心机

15ml离心管

PBS缓冲液

胰蛋白酶消化液（如需）

冻存管

T25培养瓶或6cm培养皿

复苏步骤：

培养基预热

将完全培养基置于37℃水浴中回温，并用75%酒精擦拭外表面后移入无菌操作台内备用。

取出冻存管

戴上护目镜及厚毛线手套，从液氮罐中取出细胞冻存管。

检查冻存管是否密封良好，防止液氮泄漏3。

快速解冻

将冻存管迅速放入37℃水浴中摇晃解冻，直至内容物完全融化。

解冻后立即用75%酒精擦拭冻存管外壁，避免污染。

细胞重悬

向15ml离心管中加入约10ml完全培养基。

将冻存管中的细胞悬液（通常为1.5ml）转移至离心管中，轻轻吹打混匀。

离心处理

在常温下以1200转/分钟的速度离心5分钟。

弃去上清液，加入5ml新鲜完全培养基重悬细胞。

接种与培养

将细胞悬液接种至T25培养瓶或6cm培养皿中。

放入37℃，5% CO2培养箱中静置培养过夜。

注意事项

安全性

复苏过程中务必注意安全，特别是处理液氮时要穿戴适当的防护装备。

若发现冻存管有液氮渗入，应先拧松盖子排出液氮再进行后续操作。

培养基适应性

初次复苏时可暂时不添加抗生素，以便细胞更好地恢复状态。

如果需要更换培养基成分，应逐步调整以确保细胞适应新环境。

细胞状态观察

新复苏的细胞较为脆弱，建议前三天不要频繁扰动。

定期拍照记录细胞生长情况，便于后续研究对比

标签：HT22小鼠海马神经元细胞（复苏）

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