描述

Cetuximab  (anti-EGFR)是一种新型的分子靶向药物， 是 EGFR  的抑制剂， 同时也是人源 EGFR 单克隆抗体，与 EGFR 的胞外结合区域相互作用并抑制其受配体刺激。

靶点

EGFR  (Cell-free assay) ：0.39 nM(Kd)

体外

Cetuximab (anti-EGFR)是一种重组嵌合的单克隆抗体， 与人类 EGFR 受体具有高度亲和力。 它与 EGFR 结合、抑制其受体相关的激酶的磷酸化合激活，从而导致细胞生长受到抑制、诱导 细胞凋亡并减少 VEGF 的产生。Cetuximab 具有显著的单药抗肿瘤作用，在高表达 EGFR 蛋白 的 NPC 细胞系中与 cisplatin 或 paclitaxel 具有加成作用，但对低表达 EGFR 的 NPC 细胞系 (如 CNE-2 和 C666- 1 )的作用甚微。 Cetuximab  阻止 EGFR 与配体的相互作用，抑制下游 RAS-ERK 激活。它能够促进内质网应激反应(ER stress) ，促使 ER 蛋白转运至细胞膜。它 竞争性地抑制配体结合， 抑制酪氨酸激酶激活， 导致受体下调。除了竞争性抑制作用， cetuximab 与 EGFR 结合还可能引起受体内在化和被破坏。

体内

在小鼠移植瘤模型中， Cetuximab 能够增强几种化疗药物的抗肿瘤活性。它通过多种机制，包 括抑制细胞周期的进展，将细胞周期阻滞在 G1 期、减少 S 期细胞数目来发挥其抗肿瘤作用。  Cetuximab 将细胞阻滞在 G1 期还能引起凋亡，通过诱导和激活相关促凋亡分子。单独给药或 是与 carboplatin 协同给药能够引起肿瘤大小减少、转移扩散减少、减少细胞表面表达 EGFR、 无 BRAF 和 K-ras 突变的 NCI-N87 肿瘤中 MVD。而在源自于 MKN-45 的肿瘤中作用甚微(其 肿瘤表型是 BRAF 和 K-ras 行盛行，但胞质内 EGFR 弱表达)。

细胞实验

Objective: 细胞活力检测

Cells: HNE1 和 CNE2 细胞

Concentrations: 62.5, 125, 250, 500, 1000 或 2000 µg/ml

Incubation Time: 48 h

Method: 将细胞以 5 × 103 个细胞/孔的密度培养与平底 96 孔板。在 37℃、  5%      CO2 的条件下孵育 24 小时后，将 200 μL 用培养基稀释成不同浓度的 cetuximab        (62.5, 125, 250, 500, 1000 或 2000 µg/mL)和/或 cisplatin (0.25, 0.5, 1, 2, 4 或            8 µg/mL)加入每孔。处理 48 小时后，向每孔加入 10 μL CCK-8。孵育 2 小时后，通过 检测 450 nm 处的吸收光值检测细胞活力。

Objective: To analyze the apoptosis of CRC cells

Cells: human DiFi CRC (Colorectal Cancer) cells

Concentrations: 10 pg/ml

Incubation Time: 72h

Method: To analyze the apoptosis, cells were seeded into 6-well plates (3 ×       105 cells per well). After 24 h, cells were cultured both in the absence and presence of drugs. Cell death and apoptosis were assessed by cytofluorimetric analysis using PE-annexin V and 7-aminoactinomycin D (7-AAD) according to the manufacturer's  instructions at different time points.

动物实验

Objective: Cetuximab 在小鼠胃癌模型中的抗肿瘤活性

Animal Models: 人类胃癌的裸鼠模型( CD-1/nu-nu mice )

Formulation: 0.9% NaCl

Dosages: 1 mg/kg

Administration: i.p.

Objective: To investigate the relationship between the EGFR levels and the responsiveness to cetuximab treatment in human cancer xenograft models

Animal Models: Female athymic, nude mice were implanted s.c. with ~1 mm3 tumor fragments

Formulation: PBS

Dosages: 0.25, 0.5 or 1 mg/mouse

Administration: i.p.