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产品名称:
多聚D-赖氨酸溶液(5mg/ml)(分子量15万~30万)(细胞培养级)
型号:
CS-01F99262
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产品简介
多聚D-赖氨酸溶液(5mg/ml)(分子量15万~30万)(细胞培养级)现货供应,价格实惠。
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一、概述:

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多聚D-赖氨酸溶液(5mg/ml)(分子量15万~30)(细胞培养级)

Poly-D-lysine Solution (5 mg/ml), Mw 150,000-300,000

2mg5mg/ml

CS-01F99262

本品为无菌的多聚D-赖氨酸(Poly-D-lysine)溶液,浓度为5mg/ml,使用时直接稀释到需要浓度即可。本溶液以分子量为150,000-300,000Poly-D-lysine配制所得。本品用作细胞培养基质,推荐使用量为:对于25cm2的培养板需要0.1mg/ml的聚赖氨酸溶液约0.5ml-1.0ml

多聚赖氨酸(poly-lysine)是一种带正电荷的氨基酸聚合物,能够结合于DNA,红细胞膜或任何带负电荷蛋白。是一种非特异性的细胞粘附因子,促进细胞吸附到固相基质上。作用机理在于其可增强细胞膜表面的负电荷离子和固相基质表面(如细胞培养皿,载玻片等)的静电相互作用。当吸附到培养表面后,多聚赖氨酸提高用于细胞结合的阳离子结合位点数。多聚赖氨酸分子量的大小与粘度相关,即分子量较低,粘度较低;分子量较高,粘度较高,提供的粘附位点也较多。分子量>30,000的聚赖氨酸适用于促进细胞粘附到固体基质。

多聚赖氨酸(poly-lysine)有两种常见亚型,D-L-型。由于多聚赖氨酸是细胞结合的非特异性粘附因子,因此两种亚型都可用作包被固体基质。然而在细胞培养相关应用中,某些细胞会消化多聚-L-赖氨酸并吸收,摄入过多的多聚-L-赖氨酸会产生一定的细胞毒性。因此,遇到这种情况首选多聚-D-赖氨酸(Poly-D-lysine)。

中文别名:多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐,分子量150,000-300,000

英文别名:Poly-D-lysine hydrobromide, Mw 150,000-300,000; PDL , Mw 150,000-300,000;

CAS27964-99-4

分子式:D-Lys-(D-Lys)n-D-Lys xHBr

分子量:150,000-300,000

外观:无色至黄色溶液
储存条件:-20℃,有效期两年

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:多聚D-赖氨酸溶液(5mg/ml)(分子量15万~30万)(细胞培养级) 2mg(5mg/ml) 

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