上海莼试生物技术有限公司
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分子生物学试剂 > 克隆与表达 > 12%预制胶,12孔
产品名称:
12%预制胶,12孔
型号:
CS-01F99261
生产地址
国产
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电议
产品简介
12%预制胶,12孔现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

  产品属性: 

产品名称

英文名称

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12%预制胶,12

Precast Protein Gels, 12%, 12 wells

1盒(10块)

CS-01F99261

本品通过pH中性缓冲液制备,丙烯酰胺与甲叉丙烯酰胺配比是291,其规格为浓缩胶5%,分离胶12%,胶板尺寸10×8cm,凝胶厚度1 mm12孔梳齿,单孔最大上样量30 µl。电泳及转膜缓冲液使用传统的tris-glycine缓冲液,蛋白条带直且尖锐。本品兼容Biorad,天能及北京六一的mini胶电泳槽及其他任何胶板宽度在10 cm的电泳槽。

N,N-亚甲基双丙烯酰胺(甲叉丙烯酰胺)交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质。与传统实验室自行配制凝胶相比,使用预制胶具有以下优点:1)即开即用,不用再配制N种溶液、灌胶、等胶凝固,节省了宝贵的时间和精力;2)不用接触几种具有积累性神经毒性的试剂(丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺:神经毒性和遗传毒性;TEMED:强神经毒;过硫酸铵:可严重损伤呼吸道,眼睛,皮肤);3)大规模生产,胶与胶之间重复性好,质量稳定,不像手工灌胶那样结果差异大。

使用方法

1)剪开包装取出胶,撕去胶板底端胶纸,将预制胶固定在电泳槽中,加入电泳缓冲液没过梳齿部位,双手按住梳子左右部位将其平稳缓慢(一定要慢,否则会将胶齿拔断或拔歪)拔出,在前后板的上方中央卡上一个“V”型卡(通过加固前后板,不仅可防止枪头上样用力过猛撬开两板产生缝隙,还可稳定跑胶质量,电泳过程中“V”型卡不可取出),上样后进行电泳,电泳后取出胶板,用镊子或小螺丝刀沿左右两板间的缝隙将两板别开,将胶取出,弃去塑料板。

2)电泳:使用《分子克隆》指定的 tris-glycine电泳缓冲液(tris 25 mM, glycine 250 mM, SDS 0.1%)。推荐使用低压100V15min换高压150V跑至电泳结束。

3)转膜:使用《分子克隆》的 tris-glycine 电转缓冲液(含 20%甲醇或乙醇),操作与实验室原有操作完全相同。

储存条件:4℃,有效期一年。

本品通过pH中性缓冲液制备,丙烯酰胺与甲叉丙烯酰胺配比是291,其规格为浓缩胶5%,分离胶12%,胶板尺寸10×8cm,凝胶厚度1 mm12孔梳齿,单孔最大上样量30 µl。电泳及转膜缓冲液使用传统的tris-glycine缓冲液,蛋白条带直且尖锐。本品兼容Biorad,天能及北京六一的mini胶电泳槽及其他任何胶板宽度在10 cm的电泳槽。

N,N-亚甲基双丙烯酰胺(甲叉丙烯酰胺)交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质。与传统实验室自行配制凝胶相比,使用预制胶具有以下优点:1)即开即用,不用再配制N种溶液、灌胶、等胶凝固,节省了宝贵的时间和精力;2)不用接触几种具有积累性神经毒性的试剂(丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺:神经毒性和遗传毒性;TEMED:强神经毒;过硫酸铵:可严重损伤呼吸道,眼睛,皮肤);3)大规模生产,胶与胶之间重复性好,质量稳定,不像手工灌胶那样结果差异大。

使用方法

1)剪开包装取出胶,撕去胶板底端胶纸,将预制胶固定在电泳槽中,加入电泳缓冲液没过梳齿部位,双手按住梳子左右部位将其平稳缓慢(一定要慢,否则会将胶齿拔断或拔歪)拔出,在前后板的上方中央卡上一个“V”型卡(通过加固前后板,不仅可防止枪头上样用力过猛撬开两板产生缝隙,还可稳定跑胶质量,电泳过程中“V”型卡不可取出),上样后进行电泳,电泳后取出胶板,用镊子或小螺丝刀沿左右两板间的缝隙将两板别开,将胶取出,弃去塑料板。

2)电泳:使用《分子克隆》指定的 tris-glycine电泳缓冲液(tris 25 mM, glycine 250 mM, SDS 0.1%)。推荐使用低压100V15min换高压150V跑至电泳结束。

3)转膜:使用《分子克隆》的 tris-glycine 电转缓冲液(含 20%甲醇或乙醇),操作与实验室原有操作完全相同。

储存条件:4℃,有效期一年。

本品通过pH中性缓冲液制备,丙烯酰胺与甲叉丙烯酰胺配比是291,其规格为浓缩胶5%,分离胶12%,胶板尺寸10×8cm,凝胶厚度1 mm12孔梳齿,单孔最大上样量30 µl。电泳及转膜缓冲液使用传统的tris-glycine缓冲液,蛋白条带直且尖锐。本品兼容Biorad,天能及北京六一的mini胶电泳槽及其他任何胶板宽度在10 cm的电泳槽。

N,N-亚甲基双丙烯酰胺(甲叉丙烯酰胺)交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质。与传统实验室自行配制凝胶相比,使用预制胶具有以下优点:1)即开即用,不用再配制N种溶液、灌胶、等胶凝固,节省了宝贵的时间和精力;2)不用接触几种具有积累性神经毒性的试剂(丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺:神经毒性和遗传毒性;TEMED:强神经毒;过硫酸铵:可严重损伤呼吸道,眼睛,皮肤);3)大规模生产,胶与胶之间重复性好,质量稳定,不像手工灌胶那样结果差异大。

使用方法

1)剪开包装取出胶,撕去胶板底端胶纸,将预制胶固定在电泳槽中,加入电泳缓冲液没过梳齿部位,双手按住梳子左右部位将其平稳缓慢(一定要慢,否则会将胶齿拔断或拔歪)拔出,在前后板的上方中央卡上一个“V”型卡(通过加固前后板,不仅可防止枪头上样用力过猛撬开两板产生缝隙,还可稳定跑胶质量,电泳过程中“V”型卡不可取出),上样后进行电泳,电泳后取出胶板,用镊子或小螺丝刀沿左右两板间的缝隙将两板别开,将胶取出,弃去塑料板。

2)电泳:使用《分子克隆》指定的 tris-glycine电泳缓冲液(tris 25 mM, glycine 250 mM, SDS 0.1%)。推荐使用低压100V15min换高压150V跑至电泳结束。

3)转膜:使用《分子克隆》的 tris-glycine 电转缓冲液(含 20%甲醇或乙醇),操作与实验室原有操作完全相同。
储存条件:4℃,有效期一年。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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