产品属性:
产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
TOP10F`化学感受态细胞 | TOP10F′Chemically Competent Cell | 10×100μl|50×100μl | CS-01F99218 |
TOP10F`菌株来源于TOP10菌株。
将F`{lacIq Tn10(TetR)}因子转入TOP10菌株,即为TOP10F`。
该F`因子携带lacIq 抑制子,可抑制trc,tac,lac等启动子下游基因的表达,从而可以用于一些表达毒性蛋白质粒的扩繁。 recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 TOP10F可用于构建克隆,蓝白斑筛选(如用于蓝白斑筛选,需在培养基中加入IPTG诱导β-半乳糖苷酶基因的表达)实验,具有四环素抗性。 TOP10F`感受态细胞经特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率>107cfu/μg。 保存条件:-80℃ 基因型: F'{lacIq Tn10(TetR)} mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1araD139 ∆(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG 操作说明: 1.TOP10F`感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置25分钟。 2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。 4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 5.将平板倒置放于37℃培养箱 12-16h,时间过长会产生假阳性小菌落。 注意事项: 1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。 2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 |
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