产品属性:
产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
地高辛随引物标记和检测试剂盒Ⅰ(POD) |
| 1盒 | CS-01F99164 |
介绍
保存条件:-20℃冰冻保存。
保存期:一年
用途:用于 DNA 探针的随机引物标记及各种膜上杂交和原位杂交。
工作量:可用于标记0.1—3μg的探针 6次及 1000 张切片的原位杂交或12次 10×10cm 膜上杂交检测。
原理: 所谓 DNA 探针,实质上是一段已知的基因片段,应用这一基因片段即可与待测样品杂交。 如果靶基因和探针的核苷酸序列相同,就可按碱基配对原则进行核酸分子杂交,从而达到检查样品基因的目的。在随机引物法标记反应液中,有随机合成的六聚体核苷酸(hexanucleotide)作为引物, dATP、dCTP、dGTP、dTTP和 D1G-11-dUTP 作为合成底物,以单链 DNA 作为模板,在 Klenow 酶的作用下,合成掺入地高辛的DNA 链。以地高辛标记的探针与靶基因DNA 链杂交后,再通过免疫反应来 进行检测。一般通过酶标抗地高辛抗体来检测,就可以肯定杂交反应的存在。 免疫检测采用过氧化物酶系统,DAB 显色。敏感性很高。可用于膜上杂交和原位杂交。特点: (1)标记属高效标记反应。以1μg DNA 探针为例,1 小时反应即可产生0.8μg 标记探针,20 小时可产生2μg 左右的标记探针。 (2)试剂将标记反应所需的引物、核苷酸、DIG-11dUTP和Klenow 酶等混合在一起。一次标记只需吸取一次标记液,使用至为简便。 (3)标记反应适于下述对象: a.DNA 从10ng—3μg。 b.不等的DNA 长度100bp—10kb。 c.线形排列或呈高度卷曲之DNA。 d.低融点琼脂中的DNA。 (4)检测系统抗体为抗地高辛单抗+SABC。抗地高辛单抗标记生物素,效价1:1000-2000(膜上杂交)或1:1000(原位杂交)。 (5)显色剂为DAB,非常稳定。用时1:40 稀释。 (6)试剂盒敏感性达到0.1pg,足够检测出1μg 基因组DNA 中的单个基因。 |
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