病毒核酸提取试剂盒(磁珠法)CS-01F99101_上海莼试生物技术有限公司

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一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
病毒核酸提取试剂盒(磁珠法)	Magnetic Viral DNA/RNA Extraction Kit	50T\|200T	CS-01F99101

介绍

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从血清、血浆、淋巴液、无细胞体液、细胞培养上清液、尿液或各种病毒保存液中分离纯化高质量病毒DNA/RNA。独特包埋的磁珠，在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程安全、便捷，提取的病毒DNA/RNA得率高、纯度高、质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取。使用本试剂盒纯化的核酸可适用于各种常规操作，包括RT-PCR、荧光定量PCR等各种下游实验。

产品特点：

简便快捷：1小时内即可获得高质量病毒DNA或RNA。

高通量：可整合磁棒法自动化仪器或移液法自动化仪器进行高通量提取实验。

安全无毒：无需酚/氯仿等有机试剂。

保存：室温（15～25℃）干燥，可保存12个月。

注意事项：(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)

本产品适用于手工提取或自动化仪器整合。

自备试剂：异丙醇，无水乙醇。

样品应避免反复冻融，否则会导致提取的核酸片段较小且提取量降低。

若缓冲液RLCK中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
Carrier RNA冻干粉能够在室温储存至有效期。溶于RNase-Free ddH2O中的Carrier RNA溶液，应置于-20℃冷冻保存；而Carrier RNA溶液加入缓冲液RLCK后，在2～8℃能保存最多48小时，请现用现配。

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签：病毒核酸提取试剂盒(磁珠法) 50T 200T

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