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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 磁珠法动物基因组DNA提取试剂盒(肺、肾、脾)
产品名称:
磁珠法动物基因组DNA提取试剂盒(肺、肾、脾)
型号:
CS-01F99078
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产品简介
磁珠法动物基因组DNA提取试剂盒(肺、肾、脾)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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产品名称

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规格

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磁珠法动物基因组DNA提取试剂盒(肺、肾、脾)

Magnetic Animal Tissue Genomic DNA Kit

50T

CS-01F99078

介绍

 

 本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,可从样品中分离纯化高质量基因组DNA。特殊包被的磁珠在一定条件下对目的DNA具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,能够达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程安全、便捷,提取的DNA纯度高。使用本试剂盒纯化的基因组DNAOD260/OD280均在1.7-1.9之间,可以应用于各类下游分子生物学实验。

储存条件:磁珠可以在室温下(1525)运输,但请在4℃冰箱中保存,禁止冻存。蛋白酶K-20℃保存,以保证其活性。其余试剂可以室温保存,更长时间的保存可置于28℃。复检期1年。

操作步骤:

使用前请先在漂洗液中配置 70%乙醇。若裂解液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在 37℃水浴中预热 10min 溶解沉淀,摇匀后使用。

1.裂解

取适量的动物组织样本(脾脏≤20mg;肺脏≤20mg;肾脏≤20mg)用液氮研磨成粉末,并迅速转移到已加入480μl 裂解液S1150μl裂解液S2以及20μL蛋白酶K20mg/mL)的EP管中,吹打或震荡混合均匀。将EP管置于65℃水浴2530min。待冷却到室温,12000rpm 4℃离心510min

2.结合

尽量取净上清于新的1.5mL EP管中,加入等体积的异丙醇以及振荡混匀的50μL磁珠,颠倒混匀1min,静置3min。将EP管置于磁铁上进行磁分离,吸弃废液(吸净管盖及管底残液)。

3.洗涤

加入600μL漂洗液(使用前请预先配置70%乙醇),轻柔混匀12min,将EP管置于磁力架上进行磁分离,吸净管盖及管底的残液;重复本步骤一次。

4.洗脱

室温晾干510min至乙醇挥发完全,加入50100μL洗脱液,缓慢抽吸混匀,65℃水浴10min。(每隔12min轻摇EP管几下混匀)。将EP管置于磁力架上进行磁分离,小心吸取上清液至新的EP管中,进行下游实验。(判断磁珠晾干的标准:侧面观察磁珠无反光,正面观察磁珠边缘龟裂)。

注意事项:

1.动物组织(脾、肺、肾)要用液氮充分研磨。

2.整个裂解过程操作尽量温和,并在要求时间内完成。

3.如果组织液浓度较高,则建议磁珠量可适当增加,以获取高浓度 DNA

4.客户自备试剂:异丙醇、无水乙醇、蛋白酶 K

5.使用前请在漂洗液瓶中预先配制 70%乙醇。
6.磁珠在使用前一定要充分混匀。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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