上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
植物基因组DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99062
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国产
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产品简介
植物基因组DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

植物基因组DNA提取试剂盒

Plant Genomic DNA Extraction Kit

50|200

CS-01F99062

本试剂盒适用于从植物组织和植物干粉中提取总DNA,包括基因组DNA,线粒体DNA以及叶绿体DNA。本品可以处理多至100 mg的样本,可纯化获得最大为50 kbDNA,多数片段在20-30 kb之间。本试剂盒采用先进的硅胶膜技术和简单的离心程序,无需乙醇沉淀,简单快速地分离得到高纯度的DNA,有效去除PCR和其他酶促反应的抑制剂。本品可以在1小时内完成总DNA的提取, 纯化得到的DNA可以直接用于酶切、 PCR Real-Time PCR 文库构建、 Southern Blot、分子标记等下游实验。

自备试剂:β-巯基乙醇、氯仿、无水乙醇。

注意事项:

1、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。

2Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇,1ml Buffer GP11μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer GP1室温可保存1个月。

3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1Buffer GW2中加入无水乙醇。

4、使用前请检查Buffer GP1Buffer GP2是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GP1Buffer GP265℃水浴重新溶解。

5、如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在加入Buffer GP1孵育后,加入4μl DNase-FreeRNase A(100 mg/ml)RNase A本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:WE0225S

操作步骤:

1、取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约20 mg,加入液氮充分研磨。

2、将研磨后的粉末收集到离心管(自备)中,加入700μl 65℃预热的Buffer GP1(使用前在预热的Buffer GP1中加入β-巯基乙醇,使其终浓度为0.1%),迅速颠倒混匀后,将离心管置于65℃水浴20分钟,水浴过程中颠倒离心管混匀样品数次。

注意:如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100 mg/ml RNase A溶液,震荡混匀,室温放置5-10分钟。

3、加入700μl 氯仿,充分混匀,12000rpm(~~13400×g)离心5分钟。

4、小心将上层水相转入一新的离心管(自备)中,加入700μl Buffer GP2,充分混匀。

5、将步骤4中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中。若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤7.

812000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。

注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR )

9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μlBuffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA

注意:

1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)pH值低于7.0时洗脱效率不高。

2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。

3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。

4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤9;若洗脱体积小于100μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。

5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。储存条件:室温(1530)

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:植物基因组DNA提取试剂盒 50次 200次 

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