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产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
新型植物基因组DNA提取试剂盒 | NewPurify Plant Genomic DNA Extraction Kit | 50次|200次 | CS-01F99061 |
本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,适合从各种不同的植物新鲜或冻存组织中提取基因组DNA,并可最大限度地去除植物组织中的杂质。本试剂盒无需使用酚/氯仿抽提,操作安全。提取的基因组DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠,适用于PCR、荧光定量PCR、分子标记、文库构建等实验。
自备试剂:无水乙醇
实验前准备及重要注意事项: 1、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。 2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer LP3和Buffer GW2中加入无水乙醇。使用前请检查Buffer LP1和Buffer LP2是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer LP1和Buffer LP2于56℃水浴重新溶解。 操作步骤: 1、取植物新鲜组织100 mg左右或干重组织约20 mg,加入液氮充分研磨。 2、将研磨后的粉末收集到离心管(自备)中,加入400μl Buffer LP1和6μl RNase A(10 mg/ml),涡旋振荡1分钟,室温放置10分钟,使其充分裂解。 注意: 1)使用涡旋振荡或移液器吹打,充分裂解组织,组织裂解不完全会影响最终的DNA得率。 2)请勿在使用前将Buffer LP1与RNase A混合。 3、加入130μl Buffer LP2,混匀,涡旋震荡1分钟。 4、12000rpm(~~13400×g)离心5分钟,将上清移至新的离心管(自备)中。 5、加入1.5倍体积的Buffer LP3(使用前检查是否已加入无水乙醇),充分混匀(如500μl滤液加入750μl Buffer LP3)。 注意:加入Buffer LP3后应立即混匀,可能会产生沉淀但不影响后续实验。 6、将上步所得溶液和沉淀全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 注意:如吸附膜呈现绿色,向吸附柱中加入500μl无水乙醇,12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 8、重复步骤7. 9、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。 10、将吸附柱放到一个新离心管(自备)中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。 注意: 1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。 2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。 3)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10;若洗脱体积小于100μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少DNA的总产量。如果所得DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE进行洗脱。 4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。 |
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