产品特点

1、纯度高：提取的基因组DNA可直接用于下游PCR、荧光定量PCR、酶切等各种实验。

2、提取量大：可从0.1-1.0ml的全血中提取基因组DNA。

3、兼容性强：适用于处理各种抗凝血液和细胞样本。

自备试剂：无水乙醇

实验前准备及重要注意事项：

1、向蛋白酶K 中加入蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。

2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

3、本试剂盒最多可以提取0.1-1ml全血样品或1×107个白细胞。

4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。

5、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴孵育重新溶解。

6、试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。

操作步骤：

1、样品处理：

1.1、提取200 ul血液样品时，向离心管(自备)中加入样本后，可直接进行下一步实验。

1.2、当血液样本量小于200μl时，加入Buffer GR补足至200μl，再进行下一步实验。

1.3、当血液样本量超过200μl时，加入1~2.5倍体积的Buffer RCL，轻轻涡旋或颠倒混匀，12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，小心吸弃上清液，如果沉淀中还有红色，可以重复以上步骤一次。然后向沉淀中加入200μl Buffer GR，震荡至彻底混匀,再进行下一步实验。

1.4、如果处理血液样本为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血，其红细胞为有核细胞，血液样本量为5-20μl，可加入Buffer GR，补足至200μl后进行后续实验。

注意：如果下游试验对RNA敏感，可加入4μl RNase A(100mg/ml)溶液，震荡15秒，室温放置5分钟。RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。

2、向以上溶液中加入20μl 蛋白酶K ，混匀。

3、加入200μl Buffer GL，震荡至彻底混匀。

注意：不要将蛋白酶K 和Buffer GL进行预混。

4、56℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。

注意：孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。

5、加入200μl无水乙醇，颠倒混匀数次。短暂离心，使管壁和壁盖上的液体集中到管底。

6、将步骤5所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤7。

8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。

9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。

10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

注意：

1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。

2)如果要提高DNA的终浓度，可以将所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1 分钟。

3)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件：室温(15～30℃)。