产品特点

1、纯度高：提取的基因组DNA可直接用于下游PCR、荧光定量PCR、酶切等各种实验。

2、提取量大：可从0.1-20ml的全血中提取DNA，无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂。

3、兼容性强：适用于处理各种血液和细胞样本。

自备试剂：异丙醇、70%乙醇

实验前准备及重要注意事项：

1、向蛋白酶K 中加入指定用量(0.3ml/1.25ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。

2、所有离心操作均在室温下完成。

3、血液样品反复冻融，会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。所得基因组DNA也应尽可能避免反复冻融，以免降解。如果提取冷冻血液的基因组DNA，建议37℃水浴，迅速解冻后再进行后续操作。

4、血液样品的储存：

1)短期保存：已加入抗凝剂的血液样品可在2～8℃储存最多10天，对于某些实验例 如Southern杂交等，需要得到完整全长的基因组DNA，请将血液样品在2～8℃储存不超过3天，此时基因组DNA的降解程度较轻。

2)长期保存：已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存(如果提取的是高分子量的DNA，推荐使用EDTA作为抗凝剂)。

操作步骤：

一、从100～900μl全血中提取基因组(以300μl血液处理量为例)

1、取300μl全血于2ml离心管(自备)中，加入300μl(样本等体积)Buffer FG1，上下颠倒混匀5次，10000×g离心30秒，弃上清。

2、再向离心管中加入450μl(1.5倍样本体积)Buffer FG1，涡旋震荡，使沉淀完全分散。10000g离心30秒，弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上，放置2分钟。

注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上，可以减少管壁上清的回流。

3、按照附表配制Buffer FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。

注意：此混合液最好现用现配.井在配好后1小时之内用完。

4、加入150μl的Buffer FG2与蛋白酶K 的混合液，立即涡旋混匀至溶液无团块。

注意：

1)如果有多个样品同时操作，加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋震荡，不要等所有样品部加完后再震荡。

2)通常涡旋震荡3-4次.毎次5秒，可以使沉淀充分悬浮，如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入30μl的Buffer FG2/蛋白酶K 混合液，再次混旋混匀。

5、65℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。

注意：如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。

6、加入150μl导丙醇，上下颠倒彻底混匀直至出现丝状或簇状基因组DNA。

注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。如果样品中白细胞含量少，可能看不到DNA，则至少上下频倒高心管20次确保沉淀完全。

7、10000×g离心5分钟。

注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。

8、弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。

注意：少数时候沉淀可能贴壁不牢，注意不要吸弃沉淀。

9、加入300μl的70%乙醇，涡旋震荡5秒，10000×g离心5分钟，弃上清。

注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。

10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟，确保沉淀在管中 。

注意：在管底可见白色的DNA沉淀，在极少情況下沉淀可能会松弛 ，所以要缓慢倒掉上清。

11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。

注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验，但避免过度干操DNA沉淀，因过度干燥会使DNA难于溶解。

12、加入200lμl的Buffer GE，低速涡旋5秒，65℃孵育1小时溶解DNA，期间轻弹数次助溶。-20℃保存DNA。注意：如果DNA没有完全溶解，可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA，建议延长孵育时间。