上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
血块基因组DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99054
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国产
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产品简介
血块基因组DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

血块基因组DNA提取试剂盒

BloodClot Blood DNA Extraction Kit

50

CS-01F99054

介绍

 

 本试剂盒供了一种快速、简单、高效的从血片中提取基因组DNA的方法。既适用于未加抗凝剂的血液,也可用于加入EDTA、柠檬酸盐、肝素等抗凝剂的血液样本。样品裂解后,DNA被选择性的吸附到硅基质膜上。两步漂洗后,高质量的DNA被溶解到洗脱液中。纯化得到的DNA无酶抑制剂和其他杂质的残留,A260/A280的比值在1.5-2.3DNA最长可达50 kb,适用于PCRReal-time PCRSouthern blotting等实验。

自备试剂:无水乙醇

产品特点

1、适用于凝固血液样本的高纯度总DNA分离纯化。

2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀,彻底去除污染物及下游反应抑制物,快速提取高品质DNA

实验前准备及重要注意事项:

1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,避免反复冻融,以免影响其活性。

2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1Buffer PW2中加入无水乙醇,混合均匀,并在试剂瓶标签上做好标记。

3、使用前请检查Buffer GTLBuffer GC是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GCBuffer GTL56℃水浴重新溶解

4、将一个水浴锅预热至56℃,另一个水浴锅预热至70℃。

5、可将洗脱缓冲液Buffer GE预热至70℃。

操作步骤:

1、向1.5ml离心管中加入20μl 蛋白酶K 溶液,然后再加入180μl Buffer GTL

注意:若样品数量较多,蛋白酶K Buffer GTL可按比例混合,然后将200μl混合物加入到1.5ml的离心管中。

2、将取下的干血片放入上一步中的离心管中,剧烈涡旋混匀并短暂离心。56℃孵育30-60分钟,期间每隔10分钟将离心管涡旋10秒。

3、加入200μl Buffer GC,彻底涡旋混匀。短暂离心后,70℃孵育10分钟,期间每隔3分钟将离心管涡旋10秒。

注意:加入Buffer GC后可能会产生白色沉淀,大部分情况下,在孵育过程中,沉淀会消失,沉淀不会影响后续的实验。

4、待步骤3离心管中样品降为室温后加入100μl无水乙醇,轻轻颠倒混匀样品,室温放置5分钟。短暂离心,将管壁内壁的液体富集于离心管底。
储存条件:室温(1530)

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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