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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 磁珠法口腔拭子DNA提取试剂盒
产品名称:
磁珠法口腔拭子DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99049
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产品简介
磁珠法口腔拭子DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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产品名称

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磁珠法口腔拭子DNA提取试剂盒

Magbead Swab DNA Extraction Kit

96

CS-01F99049

介绍

 

 本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的口腔拭子DNA提取方法,适用于从干燥保存或在保护液中保存的口腔拭子中提取基因组DNA。在高盐存在时,DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。漂洗后,高纯度的DNA被洗脱于Buffer EB或去离子水中。纯化得到的DNA纯度好(A260/280的比值在1.7-1.9之间),完整度高(>15 kb),可用于二代测序、定量PCR、芯片检测等下游实验。

自备仪器及试剂:

1、手动单管操提取:

1)恒温混匀仪

2)2/15ml磁力架

3)异丙醇、无水乙醇

2、手动96孔深孔板提取:

1)恒温混匀仪

2)废液抽吸系统

3)手动连续分液器

4)电动连续分液器

5)手动连续分液器分液管

6)96孔深孔板磁力架

7)异丙醇、无水乙醇

实验前准备及重要注意事项:

1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配置好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。

2Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻和离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。

3Magbeads使用前需涡旋震荡20秒使其充分混匀。

4、首次使用前应按试剂瓶标签在Buffer GW1Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
5、实验过程中,磁珠在溶液中的充分混匀对于提取的得率与纯度都有很大的影响。实验过程中务必使磁珠与溶液充分混匀。不同厂家生产的恒温混匀仪震荡混匀效果有一定差异,实验过程中请注意观察磁珠状态。如出现磁珠贴壁等未充分混匀的现象,请用移液器吹吸混匀或调整震荡频率

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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