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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 大量全血基因组DNA提取试剂盒(10ml)
产品名称:
大量全血基因组DNA提取试剂盒(10ml)
型号:
CS-01F99045
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国产
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产品简介
大量全血基因组DNA提取试剂盒(10ml)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

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大量全血基因组DNA提取试剂盒(10ml)

Whole blood genomic DNA extraction kit

16次×10ml|96次×10ml

CS-01F99045

介绍

 

 本试剂盒适用于快速提取各种动物全血基因组DNA。根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞,细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

试剂盒组份(16次):

10×红细胞裂解液——————50mL

细胞核裂解液————————180mL

蛋白沉淀液—————————55mL

DNA溶解液—————————15mL

产品特点:

1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。

3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。

4.结果稳定,产量高(典型的产量10mL全血可提取出150500μg),OD260/OD280典型的比值达1.71.9,长度可达50kb150kb,可直接用于构建文库、PCRSouthern-blot和各种酶切反应。

注意事项

1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到2500g,并配备容纳50mL心管转头的传统台式离心机。

2.用户需自备异丙醇和70%乙醇。

3.典型的产量10mL全血可提取出150500μg基因组DNA(不同样品尤其疾病样品中中白细胞数量差异可能非常大,因此产量的个体差异也可能非常大)。

4.本试剂盒为溶液型,可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量(20μL10mL),请联系我们索取其它处理量的操作手册。

5.本试剂盒可运用于多种抗凝剂的全血,如EDTA、柠檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬,影响裂解效果,建议选用非肝素的

抗凝剂收集血液标本。

6.为了最佳效果,最好使用新鲜血液标本或者4℃存放小于3天的标本,不要使用反复冻融超过3次的标本,否则会严重降低产量。

储存条件:室温,有效期18个月。
本制品别名:大量全血DBA提取试剂盒|10mL全血DNA提取试剂盒

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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