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产品名称:
酵母基因组DNA快速提取试剂盒(柱式吸附)
型号:
CS-01F99040
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国产
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产品简介
酵母基因组DNA快速提取试剂盒(柱式吸附)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

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规格

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酵母基因组DNA快速提取试剂盒(柱式吸附)

Yeast genomic DNA rapid extraction kit

50

CS-01F99040

介绍

 

 本试剂盒采用DNA吸附柱和独特的溶液系统,适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组DNA。约3ml处于指数生长期的酵母培养液一般一次抽提可纯化出10-15μg的高质量的基因组DNA。纯化DNA产物可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。酵母细胞经lyticase处理去除细胞壁后,独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组份:

缓冲液YB————————————20ml

结合液CB————————————11ml

漂洗液WB————————————15ml

抑制物去除液IR—————————25ml

洗脱缓冲液EB——————————15ml

Lyticase(10U/μl)———————2500U

蛋白酶K冻干粉(20mg/ml)—————20mg

吸附柱AC————————————50

收集管(2ml)——————————50

产品特点:

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。

3.快速,简捷,单个样品裂解后操作一般可在30分钟内完成。

4.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.71.9,可直接用于PCRSouthern-blot和各种酶切反应。

注意事项:

1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2. 需要自备乙醇、异丙醇、β-巯基乙醇。

3. 开始实验前将需要的水浴先预热到37℃和70℃备用。

4. 结合液CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5. 用户需要自备Sorbitol buffer( 1M 山梨醇, 0.1M Na2EDTA14 mMβ-巯基乙醇)

配制方法:在600 ml 去离子水里面溶解182.2 克山梨醇,加入200 ml 0.5M Na2EDTA (pH 8.0) ,不需要调节PH 值,定容到1L4℃保存。临用前加0.1%β-巯基乙醇(商品化的β-巯基乙醇摩尔浓度一般为14M)

6. 菌体浓度检测一般OD600 值为1 的时候,酿酒酵母细胞是1-2×10^7cells/ml,由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量OD 值变化也很大,以上仅供参考。

7. 洗脱液EB 不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水

洗脱,但应该确保批pH 大于7.5 pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在-20℃。DNA 如果需要长期保存,可以用TE 缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl1mM EDTApH 8.0),但是EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。

储存条件:室温,有效期12个月。
本制品别名:柱式酵母DNA提取试剂盒

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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