上海莼试生物技术有限公司
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产品属性：
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
| 细胞凋亡DNA Ladder抽提试剂盒(分离基因组DNA) | Cells/Tissue Apoptosis DNA Ladder Extraction Kit | 20次|50次 | CS-01F99038 |
介绍
本试剂盒选择性从组织和细胞中分离提取凋亡DNA ladder，通过选择性分离基因组DNA与凋亡DNA ladder，最大限度的减少了基因组DNA对凋亡DNA ladder的观察干扰，因此显著的提高了检测敏感度，反应可在微量离心管进行，2.5小时完成，快速方便；无需有机抽提，检测灵敏度极高，可从约2000个凋亡细胞中检测到DNA ladder。推荐起始细胞量为5～10×10^5 个，但投入的细胞量可在1×10^5～5×10^6之间变化。原则是总细胞中应含有至少约1～2×10^4个凋亡细胞。多于2×10^4个凋亡细胞通常可获得十分清晰的凋亡DNA ladder。本试剂盒也可用于从组织中提取凋亡DNA ladder。但与培养细胞相比，整体动物组织凋亡细胞出现的时间、部位、程度等规律性差往往造成难以准确取材，可能显著影响实验结果。但只要组织确实发生凋亡，有经验的用户也可以使用本试剂盒从组织提取凋亡DNA ladder
| 试剂盒组份(50次)： Extraction buffer ———10ml 10%SDS—————————1ml Enzyme A————————1ml Enzyme B————————1ml Precipitant ——————7ml 为保持活性方便运输，Enzyme B 客户收到时为冻干粉，收到后加500μl 灭菌水（25 次）或者1ml 灭菌水（50次）溶解后－20℃保存。Enzyme A 和Enzyme B 为酶溶液，应该避免反复冻融降低活性，如果要分多次使用，最好按照每次使用量分装后－20℃保存。 注意事项 1. 溴化乙锭染色过度将降低DNA条带检测灵敏度，可用水冲洗凝胶10～30分钟。如冲洗过头可再用溴化乙锭复染。可用更灵敏的DNA染色剂SYBR Green。也可进行丙烯酰胺DNA凝胶电泳和DNA银染。 2. 对细胞进行干预处理后，凋亡可能仅在某一时间点或某一干预强度下最为明显。需要进行预试验确定最佳干预时间或强度。此时也可用凋亡小体/hoeschst染色试剂盒(ALH160)快速染色凋亡小体观察。 3. 推荐起始细胞量为5～10×10^5 个，但投入的细胞量可在1×10^5～5×10^6之间变化。原则是总细胞中应含有至少约1～2×10^4个凋亡细胞。多于2×10^4个凋亡细胞通常可获得十分清晰的凋亡DNA ladder。六孔板的一个孔相当于一个35 mm培养皿长满后可得到1～10×10^5 个细胞，如果细胞凋亡发生率为10%，经过处理可得到约1～10×10^4个凋亡细胞，应该足以获得清晰的凋亡DNA ladder。反之如果不能从＞3×10^6个细胞获得清晰的凋亡DNA ladder，表明其中凋亡细胞少于1%。此时增加细胞用量也难已奏效。 4. 从组织块提取凋亡DNA ladder。取10～20 mg组织块放入小玻璃匀浆器，加100～200μl Extraction buffer，上下手动匀浆15～20次。取出匀浆液，冰上5～10 min。振荡10秒。4500 rpm 10分钟收集上清液并转移到新1.5ml离心管，执行提取步骤3。另外一种方法是将30～50mg组织剪碎后在PBS里面匀浆，制成细胞悬液，离心收集细胞后接步骤2继续执行提取。 5. 采用高质量琼脂糖，使用宽度较小和厚度较窄的样品梳子，制作较薄的琼脂糖凝胶(厚度约2～4 mm)；用较低的电压进行慢速电泳，将显著增加凋亡DNA条带检测灵敏度。电泳距离不要太长，否则将使小的凋亡DNA条带弥散而降低分辨率。 |
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