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产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
M13噬菌体单链DNA提取试剂盒 | M13 phage single strand genomic DNA rapid extraction kit | 50次|100次|200次 | CS-01F99036 |
M13和其它的丝状噬菌体载体,在文库构建和为序列测序提供单链DNA和引人突变方面十分有用。将适量M13丝状噬菌体或者相关噬粒(M13来源)感染的液体培养物离心,上清中的单链噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净噬菌体单链DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点: 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。 节省时间,简捷,单个样品操作一般可在10分钟内完成。 产量高,典型的产量800μL M13丝状噬菌体上清可以提取3μg噬菌体单链DNA。 多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9。可以直接用来测序,一般典型可辨认读长达650bp。 保存事项: 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 结合液MB低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。 注意事项: 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C或者类似离心机。 开始实验前将需要的水浴先预热到50℃备用。 结合液MB含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 操作步骤: 以800μL噬菌体感染细菌培养上清提取举例,第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 将M13丝状噬菌体或者相关噬粒(M13来源)感染的液体培养物分装在1.5毫升离心管,12000rpm离心5分钟沉淀菌体。 小心取800μL上清转入新的1.5mL离心管,加入400μL结合液MB,充分混匀。 注:如果使用的上清大于或者小于800μL,则结合液MB的用量需要按照比例增加或者减少。 将上述混合物加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13000rpm离心15秒,倒掉收集管中的废液。 注:吸附柱一次最多只可以容纳大约700μL混合物,因此需要分次把混合物加到吸附柱内,重复步骤3。 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm离心30秒,弃废液。 将吸附柱AC放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加60μL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在50℃水浴中预热),室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟。如果想得到较多量的DNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,10000rpm离心1分钟。 注:洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于40μL,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
DNA可以存放在2~8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。 |
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