上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
柱式动物DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99024
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国产
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产品简介
柱式动物DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

柱式动物DNA提取试剂盒

Animal DNA column extraction kit

50

CS-01F99024

本试剂盒是在我司动物DNA提取试剂盒的基础上改良而得的柱式升级产品,主要用于快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组DNA

产品特点:

1. DNA更加纯净,大多数DNA样品的OD260/280值在1.8-1.9之间。

2. DNA产率一般在200μg/g左右(跟组织种类密切相关)

3.可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应。

4. 操作更加简单,离心吸附操作代替离心沉淀,整个过程室温操作约10分钟,适合大规模样品处理。

5. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。

6. 性价比高,质量和国外同类产品相当,但价格更便宜。

储存条件:常温运输和保存、有效期一年。

使用方法:

注意:溶液A容易产生沉淀,溶液B十分粘稠,用前均需要在65℃水浴中加热使沉淀溶解或粘稠度降低,用前充分摇匀。

1. 根据使用材料的不同进行下列操作:

a)对贴壁细胞:吸尽培养液,在每10平方厘米细胞中加入0.8mL预热的溶液A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解,然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。

b)对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每1-5×106悬浮细胞中加入0.8mL预热的溶液A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。如果是fibroblastscarcinoma细胞,0.8mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。

c)对新鲜或冷冻的组织:先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入10mL15mL塑料离心管中,每50-100mg组织加0.8mL预热的溶液A,用剪切式匀浆器匀浆30秒左右,然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),建议组织的使用量不要超过50mg

d)DNAhold保存组织:先用纸吸去DNAhold液体后再剪切成小块,其余操作同新鲜或冷冻组织的处理。

2. 加入0.4mL预热的溶液B到裂解液中。由于溶液B十分粘稠,可将1mL枪头剪掉一截再用,也可以用称量方法加0.4 g。加入溶液B后需要颠倒数次充分混匀。

3. 65℃水浴5-10分钟。如果室温放置,DNA产量将降低10-20%

4. 加入0.2mL自备氯仿,振荡器上充分振荡混均30秒,此时溶液将呈乳白色。一定要确保离心管底的液体被震荡起来。

5. 1200015000g室温离心2分钟。上清透明,中间层为白膜(蛋白层)

6.小心将上清液平均转移到两个新的离心管中,避免触及中间的白膜。

7. 每个管中加入1.5倍体积的溶液C,充分颠倒混匀。

8. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,1200015000g室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,1200015000g室温离心半分钟,弃穿透液)

9. 0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中,1200015000g室温离心半分钟,弃穿透液。

10. 0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中,1200015000g室温离心半分钟,弃穿透液。

11. 1200015000g室温再离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会污染DNA

12.室温放置半分钟使残留乙醇挥发。

13. 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中,加入50-100μL DNA洗脱液2.0,室温放置离心吸附柱1-2分钟。
14. 1200015000g室温离心半分钟,离心管中溶液即为DNA样品,可以立即使用或存放于冰箱待用。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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