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产品名称:
柱式冻存血液DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99023
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产品简介
柱式冻存血液DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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柱式冻存血液DNA提取试剂盒

Frozen blood DNA column extraction kit

50

CS-01F99023

血液DNA是重要的研究材料,但是血液DNA在常温下存放的时间很短,因此很多血液样品都是冻凝存放。由于冻存过程中形成的冰晶会刺破细胞膜,释放出DNA,因此从冻存血液中高效提取DNA一直是个棘手的问题。本产品就是北京我公司开发的专门用于从冻存血液中提取DNA的试剂盒。

产品特点:

1.适用于各种动物血液,包括禽类和昆虫。

2. 微量提取,每次可处理400μL 血液。

3. DNA 完整性好,纯化后长度在20-50 Kb 之间。

4. DNA 纯净,OD260/OD2801.8-2.0 之间,可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。DNA产量一般在10μg/mL 血液。

5. 操作简单,整个过程约20分钟,室温操作,适合大规模样品处理。

储存条件:常温运输和保存,有效期一年。

使用方法:

1.-20℃或更低的冰箱中取出血液样品,室温下静置融化。

2. 400μL 解冻的血液转移到一个1.5mL的塑料离心管中,加入400μL溶液A,充分震荡混匀。如果是禽类血液,则少加10倍,只加40μL

3.在混合液中加入400μL溶液B200μL 氯仿(自备),振荡1分钟。由于离心管比较满,所以需要确保管底溶液转动起来,否则只是液面振动而已。

4. 412000 g离心10分钟,小心将上清转移至一新的1.5mL塑料离心管

中。注意:最好不要室温离心,如果室温离心,则离心后部分样品的中间白色层可能会很厚,只能得到很少的上清。

5. 将约0.7-0.8mL上清转移到10-15mL塑料离心管中(不要使用玻璃离心管,否则DNA 会吸附到管壁上。常用的培养提质粒用的细菌的培养管即可)

6. 加入2.5倍上清体积的溶液C(2mL),立即摇晃混匀。

7. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中,每次0.7mL左右,转移后静置2-5分钟,以使DNA与膜充分结合,然后室温12000 g离心30秒,弃收集管中的废液,然后再加入0.7mL,重复上述操作,直到全部混合液挂柱。

8.在离心吸附柱中加入0.7mL 通用洗柱液,室温12000 g离心30秒,弃收集管中的废液。

9.在离心吸附柱中再加入0.3mL 通用洗柱液,室温12000 g离心30秒,弃收集管中的废液。

10.室温12000 g离心30秒,去尽残留液体(此步骤十分重要,不要省略,否则残留的含乙醇的通用洗柱液将抑制后续的酶反应)

11. 将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管中,加入50μL DNA 洗脱液2.0,室温放置2分钟。如果将DNA 洗脱液2.065℃预热后再使用,洗脱DNA的效果更佳。

12.室温12000 g离心30秒,离心管底部溶液即DNA溶液,可立即使用或-20℃长期保存。
13. 本产品所用离心吸附柱吸附能力比较强,如果再次用DNA 洗脱液2.0洗脱,还能洗脱下一些血液DNA

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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