上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
柱式粪便DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99022
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国产
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产品简介
柱式粪便DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

柱式粪便DNA提取试剂盒

Stool DNA column extraction kit

50

CS-01F99022

本试剂盒是动物粪便DNA提取试剂盒(BTN70601)的柱式升级产品,专门用于从各种动物粪便中快速提取高质量的DNA

产品特点:

1. 操作更加简单快速,一个样品只需要十多分钟的时间。

2. DNA 更加纯净,OD260/280一般都在1.8以上,得到的DNA样品原液或稀释液可以直接用于PCR扩增。

3. 每次微量提取可以处理100-300mg左右的样品,能得到5μg左右DNA,片段长度在30 Kb左右。

4.可以同时提取到肠道上皮细胞和可能的肠道病原菌的DNA

5. 试剂无毒无害,环保。

储存条件:常温运输及保存,有效期一年。

使用方法:

1. 65℃预热溶液A,待其沉淀溶化后充分混匀,取0.5mL加入到1.5mL塑料离心管中并放置于65℃待用。

2. 称取 0.1-0.3 g的粪便,加入到含预热溶液A的离心管中,震荡器上剧烈震荡5-10分钟。如果是扩量操作,可以使用更多粪便和较大离心管。也可以将同一种粪便在较大离心管中震荡处理,然后再分到1.5mL离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管,一定要让管底的粪便震荡起来。

3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。

4. 1200015000g室温离心3分钟,将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色,实际颜色随样品而异,上清液的体积一般为300-400μL)

5.在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色或淡黄色混浊状。

6. 将离心管冰浴至少5分钟。

7. 1200015000g室温离心3分钟,转移上清到新的1.5mL离心管中,上清液颜色将比第4 步得到的上清的颜色稍淡,体积在0.7mL左右。

注意:下面第8-9 步的氯仿抽提操作可以省略,直接进入第10 步,但DNA的产量会低50%左右,OD260/2801.7-1.8。如果直接进入第10 步,则转移的溶液体积不要超过0.6mL,否则没有空间加溶液C

8. 加入0.2mL的氯仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。

9. 1200015000g室温离心3分钟,小心转移上清到新离心管中。说明:离心后两相交界面将有白色膜状物,其中有机相部分颜色较深,一般呈淡棕色。将上清转移到新的1.5mL离心管时,不要超过0.6mL,否则没有空间加溶液C。如果有多余的可以弃之不用。

10. 加入1.5倍体积的溶液C,上下颠倒30秒混匀。

11. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,1200015000g室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,1200015000g室温离心半分钟,弃穿透液)

12. 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,1200015000g室温离心半分钟,弃穿透液。

13. 如果有必要,可以再加0.3mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,1200015000g室温离心半分钟,弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的DNA的纯度稍有提高,但产量稍微有所降低。

14. 1200015000g室温再离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会污染DNA

15. 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中,加入50-100μl DNA洗脱液2.0

16.室温放置离心吸附柱1-2分钟。
17. 1200015000g室温离心半分钟,离心管中溶液即为DNA样品,可以立即使用或存放于冰箱待用。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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