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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)
产品名称:
海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)
型号:
CS-01F99020
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产品简介
海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

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海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)

Marine animal DNA column extraction kit

50

CS-01F99020

本试剂盒是在柱式动物DNA提取试剂盒(BTN71206)试剂盒基础上优化改良而得,专门针对海洋动物的基因组DNA提取的试剂盒,可用于鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物和水产动物的荃因组DNA提取,可以有效去除海洋动物组织中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂质。

产品特点:

1.使用本试剂盒提取的基因组DNA可适用于各种常规分子生物学操作,如:酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等试验。

2.操作简单安全,1小时内即可获得超纯的基因组DNA,纯化过程中不需要使用苯酚氯仿等有机试剂。

3.应用广泛,适用于多种动物细胞和动物组织等。

4.性价比高,质量和国外同类试剂盒相当,价格更低。

储存条件:常温运输及保存(蛋白酶K溶液需要低温运输,-20℃保存),有效期一年。

使用方法:

使用前请先在溶液C和通用洗柱液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

1.切取不多于30mg的组织材料,放入装有200μL溶液A的离心管中,涡旋振荡15秒。注意:根据提取的组织不同,起始量也稍有不同,腮的细胞量较大,一般建议提取量不超过20mg。如果需要去除RNA,可加入40μL RNase A(10mg/mL)溶液(客户自备,BTN3160),振荡15秒,室温放置5分钟。

2.加入20μL蛋白酶K溶液(20mg/mL),涡旋混匀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。在56℃下放置,直至组织完全溶解,简短离心以去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤。注意:不同组织裂解时间不同,通常需0.52小时即可完成。扇贝组织0.5小时基本可裂解完全,虾和鱼类组织1小时。每小时振荡混合样品23次,每次振荡混匀15秒。

3.加入200μL溶液B,充分颠倒混匀,70℃放置10分钟,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意:加入溶液B时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。

4.加入200μL无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个离心吸附柱中(吸附柱放入收集管中)12000rpm(13400×g)离心30秒,倒掉废液,将吸附柱放回收集管中。

6.向离心吸附柱中加入500μL溶液C(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)12000rpm(13400×g)离心30秒,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。

7.向吸附柱中加入600μL通用洗柱液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)12000rpm(13400×g)离心30秒,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。

8.重复操作步骤7

9.将吸附柱放回收集管中,12000rpm(13400×g)离心2分钟,倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR)实验。
10.将吸附柱转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50200μL通用洗脱液,室温放置25分钟,12000rpm(13400×g)离心2分钟,将溶液收集到离心管中。注意:通用洗脱液的体积不应少于50μL,体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱中,室温放置2分钟,12000rpm(13400×g)离心2分钟。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用超纯水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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