上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
柱式毛发DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99018
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国产
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产品简介
柱式毛发DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

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柱式毛发DNA提取试剂盒

Hair DNA column extraction kit

50

CS-01F99018

动物毛发不容易降解,同时含有大量的线粒体,所以是考古研究、法医研究和线粒体研究等领域的重要性实验材料。目前市场上专门用于毛发样品DNA提取的产品很少,为此我们研发了本产品。

产品特点:

1.充分的酶法降解和快速的柱式提取相结合,前者使DNA充分释放,后者使杂质充分被去除。

2.DNA回收率一般在0.5μg/100mg左右(理论产率一般是0.1-1.5μg之间)

3.DNA纯度高,OD比值一般在1.6-1.8之间。

4.提取的DNA能够用于电泳、酶切、杂交检测和PCR

5.适合于动物的各种毛发。

储存条件:常温运输及保存(蛋白酶K溶液需要-20℃保存),有效期一年。

使用方法:

1.30-50mg左右毛发充分剪碎(成芝麻大小就可以),最后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意:最好从靠近根部的地方剪取样品。

2.加入1mL溶液A(使用之前需取本次实验所需的溶液A现加入自备的β-巯基乙醇,β-巯基乙醇的终浓度为5%)20μL蛋白酶K溶液(20mg/mL)37℃保温10小时(一般过夜保温就可以)

注意:最好让反应体系处于摇晃状态,此保温长度一般可以让毛发溶化。

3.加入0.3mL的溶液B0.2mL的自备氯仿,振荡器上振荡30秒充分混匀。

4.12000rpm室温离心3分钟,小心将上清转移到新的1.5mL塑料离心管中。

5.在上清液中加入等体积的溶液C,上下颠倒30秒充分混匀。

6.将混合液分两次转移到离心吸附柱中。每次是先将0.7-0.8mL混合液转移到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000rpm室温1分钟,弃穿透液。再把剩余的一半上柱,重复此操作。

7.0.7mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。

8.0.3mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中,12000rpm离心半分钟(此步为第二次洗涤,一般可以省略)

9.空甩离心吸附柱半分钟去除残留液体。

10.将离心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加入30μL通用洗脱液。

11.12000rpm离心1分钟,管底即为毛发DNA溶液,可立即用于PCR,也可长期保存在-20℃。
注意:由于头发中DNA的含量十分少,所以电泳检测时即使全部上样也只能看见十分微弱的DNA条带。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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