上海莼试生物技术有限公司
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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 柱式尿液DNA提取试剂盒
产品名称:
柱式尿液DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99017
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国产
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产品简介
柱式尿液DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

柱式尿液DNA提取试剂盒

Urine DNA column extraction kit

50

CS-01F99017

尿液中的DNA主要是来自于尿道中脱落的细胞,用尿液DNA进行分子生物学基础研究和临床诊断有很多特殊的优点:

1)尿液收集物是非介入、无创伤性的。

2)从尿液中提取DNA要比从血液中提取DNA更加简单。本产品就是专门用于从尿液中提取基因组DNA的产品,提取的DNA可直接用于PCR反应。

产品特点:

1.操作简单,整个过程室温操作约20分钟,适合大规模样品处理。

2.DNA产率女性一般为53-200ng/mL尿液,男性一般为3-50ng/mL尿液。

3.所提取的DNA纯净,可直接用于PCRDNA甲基化鉴定、癌症检测等。

4.安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。

5.性价比高,质量和国外同类产品相当,但价格更便宜。

储存条件:常温运输、4℃保存,有效期一年。

使用方法:

1.收集1.5-50mL尿液样品到适当的离心管中,室温2000rpm离心10分钟。

2.小心吸弃上清,加入300μL溶液A,漩涡震荡,直到溶液变得澄清。

3.将液体转移到离心吸附柱中并静置2-5分钟,以使DNA与膜充分结合。

4.12000rpm离心半分钟,DNA将吸附到膜上,弃收集管中的废液。

5.加入0.7mL的通用洗柱液,12000rpm离心半分钟,弃收集管中的废液。

6.加入0.3mL的通用洗柱液,12000rpm离心半分钟,弃收集管中的废液。

7.12000rpm离心半分钟,甩干残留液体。此步很重要,以去除膜上残留通用洗柱液,否则会影响后续反应。

8.将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管(自备)中,加入30μL通用洗脱液,室温放置2分钟。如果将通用洗脱液在65℃预热后再使用,洗脱DNA的效果会更好。
9.12000rpm离心半分钟,离心管底溶液即DNA溶液。可以立即使用或放冰箱长期保存。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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