上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
柱式软体动物DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99015
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国产
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产品简介
柱式软体动物DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

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柱式软体动物DNA提取试剂盒

Mollusc DNA column extraction kit

50

CS-01F99015

本试剂盒是专门用于从各种软体动物组织中提取基因组DNA的试剂盒。其原理是基于阳离子去垢剂CTAB在适当的离子强度条件下,特异地跟基因组DNA 结合形成沉淀,然后在用硅胶膜技术进行进一步纯化。

产品特点:

1.适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物动物,包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。

2. 提取到的基因组DNA 完整性,其中最长可以到达长度一般在20-50kb

3. DNA 纯净,OD260/280一般都在1.9左右、DNA片段大小在30-50 Kb左右,可直接用于PCR、酶切、杂交等。

4. 操作简单,整个过程约30分钟。

5. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。

6. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。

储存条件:常温运输和保存,有效期一年。

使用方法:

1. 匀浆方法一:称取0.1-0.3g软体动物组织,转移到塑料研钵中,液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意:最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵,因为DNA 会吸附在表面,影响得率。在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀,需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。进入第三步。

2. 匀浆方法二:将0.1-0.3g软体动物组织剪成小块,转移到10-15mL塑料管中(培养细菌那种离心管即可),加入1mL 65℃预热的溶液A,用Polytron 式匀浆机(剪切式匀浆机)匀浆1分钟左右。

3. 65℃保温5-30分钟,其间最好吹打混匀2-3次。

4.转移到新的1.5mL离心管中,1200015000g室温离心3分钟。

5. 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处理。

6.在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色混浊状。

7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。

8. 1200015000g室温离心3分钟,转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。

9. 加入0.2mL的氯仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。

10. 1200015000g室温离心3分钟,两相交界面将有白色膜状物,小心转移上清到新1.5-5mL塑料离心管中。注意:由于下一步要加1.5倍体积的溶液C,所以新的离心管的体积要足够大。

11. 加入1.5倍体积的溶液C,上下颠倒30秒混匀,然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。

12. 每次转移0.7-0.8mL 混合液后,室温放置5-10分钟。

13. 1200015000g室温1分钟,弃穿透液。

14. 对需要多次上柱的样品,可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中,重复第12-14 步的操作。

15. 0.7mL 通用洗柱液加入离心柱,室温离心1分钟,弃穿透液。

16.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液,1200015000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)

17. 空甩1分钟去除残留液体。

18. 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加入30-100μL DNA 洗脱液2.0

19.室温放置5分钟后离心1分钟,管底即为软体动物DNA溶液,可立即使用,也可长期保存在-20℃。
20.可以重复上步一次,以洗脱更多的DNA(第二次洗脱的DNA一般有第一次的30%左右)

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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