上海莼试生物技术有限公司
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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 柱式拭子DNA提取试剂盒
产品名称:
柱式拭子DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99014
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国产
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产品简介
柱式拭子DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

柱式拭子DNA提取试剂盒

Swab DNA column extraction kit

50

CS-01F99014

拭子是一种常用的的生物样品取材方法,可以用于PCR等分子生物学分析。拭子取材的主要特点是快捷和非介入性(不会对对象造成伤害),尤其适用于大规模筛查取样和特殊群体(如儿童)和组织(如口腔)的取样。市场上专门用于拭子样品DNA提取的产品不多,为此我司开发了本产品。

产品特点:

1.快速柱式操作,整个过程只需要十分钟。

2. DNA纯度高,OD比值一般在1.8左右。

3. 回收率高,一般在0.5μg DNA/拭子左右。

4. 环保安全,不需要使用任何有毒的试剂(包括酚和氯仿)

5. 提取的DNA能够用于电泳、酶切、杂交检测和PCR

6. 本产品可以跟拭子保存液(BTN80802)结合使用,用于提取保存的样品。

储存条件:常温运输和保存,有效期一年。

使用方法:

1. 将拭子涂抹面颊的口腔内表面约十次,放入加有0.5mL通用上柱液的1.5mL塑料离心管中。

2. 剪去口腔拭子柄部,留药棉头于离心管中,盖上离心盖后振荡一分钟。

3. 将上清液(0.4mL)和拭子一起全部转移到离心吸附柱中。

4. 12000rpm离心一分钟后弃穿透液和拭子。

5.在离心吸附柱中加入700μl的通用洗柱液,室温12000rpm离心1分钟,弃收集管中废液。

6.室温12000rpm离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(DNA上样时不能沉淀到加样孔中)

7. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中,加入30-50μl DNA洗脱液,室温放置2分钟。

8.室温12000rpm离心1分钟,离心管底溶液即DNA

:从非冻型拭子DNA保存液保存的拭子中提取DNA(仅供参考,本产品不提供所需试剂,如果需要请另行购买)

1. 0.5mL非冻型拭子DNA保存液加入到自备的1.5mL塑料离心管中待用。

2. 用拭子涂抹口腔内表面、鼻腔表面或其他待取样器管的表面约十次。

3. 将拭子放入到加有的1.5mL塑料离心管中,剪去专用拭子柄部,留药棉头于离心管中,盖上离心管管盖后即可长期保存、运输。

4. 保存或运输结束后将药棉头挤干溶液后取出。

5.在剩下的溶液(0.5mL)中加入1mL通用上柱液,颠倒混匀。

6. 先取0.75mL混合液到离心吸附柱中,室温12000rpm离心1分钟后弃穿透液,然后在将剩下的0.75mL混合液到离心吸附柱中,室温12000rpm离心1分钟后弃穿透液。
7.其余操作接柱式拭子DNA提取试剂盒操作(见上)的第5步。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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