产品特点

1、专用于从大鼠或小鼠的鼠尾中分离纯化高纯度总DNA。

2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀，彻底去除污染物及下游反应抑制物，快速提取高品质DNA。

实验前准备及重要注意事项：

1、向蛋白酶K中加入1.25mL蛋白酶K储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。

2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。

3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。

4、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。

操作步骤：

1、取一段大鼠或两段小鼠长度为0.4-0.6cm的尾巴，在液氮中研磨成细粉或剪碎放入离心管(自备)中。加入180μL Buffer GTT，振荡混匀。

注意：确保组织的起始量不要超出推荐范围。

2、加入20μL蛋白酶K，涡旋振荡，彻底混匀。

3、置于56℃水浴，直至组织溶液完全清澈，一般情况下需要消化6～8小时，孵育过程中涡旋震荡，使样品均匀分散。

注意：1)如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，必要时过夜消化或再加入20μL蛋白酶K消化，不会影响后续操作。

2)如需去除RNA，在上述步骤完成后加入4μL 100mg/ml的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置5～10分钟。

4、12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，以除掉未消化的类似于鼠毛等组织。将上清转移到一个新的离心管(自备)中。

5、加入200μL Buffer GL，涡旋震荡，充分混匀。加入200μL无水乙醇，涡旋震荡，充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。

注意：

1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。

2)如果多个样品一起操作，Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品。

3)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。

6、将步骤5中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7、向吸附柱中加入500μL Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

8、向吸附柱中加入500μL Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。

9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。

注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。

10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μlBuffer GE或灭菌水，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

注意：

1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。

2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。

3)用另外的50～200μL Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。

4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10；若洗脱体积小于200μL，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μL Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。