上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
植物DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99010
生产地址
国产
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产品简介
植物DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

植物DNA提取试剂盒

Plant DNA extraction kit

50

CS-01F99010

本试剂盒是根据经典的方法改良得到的专门用于提取新鲜或冷冻植物组织基因组DNA(包括叶绿体DNA和线粒体DNA)的试剂盒。

产品特点:

1. 操作快速,整个过程在30分钟内即可完成。

2. 纯度高,A260/A2801.9左右,可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。提取得到的DNA大小在30-50Kb 之间。

3.产率高,高于大多数同类产品(尤其是基于离心柱的提取产品)

4. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。

储存条件:常温运输及保存,RNase A溶液4℃保存,有效期一年。

使用方法:

注意:溶液A和溶液B容易产生沉淀,溶液B比较粘稠,用前均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低,用前充分摇匀。

1. 65℃预热溶液A,待其沉淀溶化后,充分混匀,取0.75mL 加入到10-15mL塑料离心管(常用于培养细菌用)中并放置于65℃待用。

2. 称取植物组织0.1-0.3g左右,剪成微小的碎片,转移到装有溶液A的离心管中短暂匀浆。匀浆过程中将产生大量泡沫,属于正常现象。也可以液氮研磨后将粉末加入到预热的溶液A(建议不要在陶器或玻璃研钵中破碎细胞,因为其中的主要成分二氧化硅会非特异地吸附DNA,降低DNA 回收量。但可以在塑料研钵中研磨)

3. 将匀浆液(包括植物碎片)全部转移到新的1.5mL塑料离心管中。注意:匀浆液较为粘稠,可将1mL 枪头剪去一截后用于转移匀浆液,不能吸取的植物碎片可倒入。

4.在匀浆液中加入0.5倍体积 65℃预热的溶液B,颠倒数次混匀。由于溶液B比较粘稠,可以将1mL 枪头剪去一截再吸取。

5. 加入15μlRNase A溶液(10mg/mL)

6. 65℃放置35分钟。如果室温放置,DNA产量会降低10-20%

7. 加入200μl自备氯仿,震荡器上充分震荡混匀30秒。

8. 1200015000g室温离心2分钟,此时两相交界面将有白色膜状物,小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中,避免触及中间层的白膜。

9. 加入1倍体积(750μl)的自备的异丙醇到上清液中,盖紧盖子后用手上下颠倒30秒混匀。此时一般将有絮状DNA沉淀出现。

10. 1200015000g室温离心3分钟。此时管底将有微小DNA沉淀,小心弃上清,注意不要丟弃DNA沉淀。

11.在离心管中加1mL 75%乙醇,短暂震荡,1200015000g室温离心3分钟,弃上清。

12. 重复上述操作一次。

13. 短暂离心,小心吸弃残留的液体(此步不要省略,否则残留的液体含乙醇将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应),室温晾干。
14. 加入50-100μl自备的TE缓冲液充分溶解DNA沉淀。直接取5-10μl电泳检测DNA,其余放冰箱备用。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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