上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
中草药DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F99009
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国产
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产品简介
中草药DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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产品名称

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中草药DNA提取试剂盒

Chinese herbal medicine DNA extraction kit

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CS-01F99009

基于PCR的中药分子鉴定方法是辨别中药真伪,保证药材质量,促进中药产业现代化的十分重要的手段。但由于日晒,高温烘烤等处理极大地破坏了中药材DNA的完整性;处理过程中多酚多糖及其氧化物也会与DNA发生复杂的化学反应,所以从中药材中提取可以用于PCRDNA 比从新鲜植物中提取要困难很多。为解决这一问题,我们公司在植物DNA提取试剂盒产品基础上开发了本产品。

产品特点:

1.适合于大多数药材。

2. 得到的DNA 纯净,OD260/280一般都在1.6以上,原液或100倍之内的稀释液一般都能直接作为PCR 模板。

3. 操作简单,整个过程只需要三十分钟左右。

4. 试剂无毒无害,环保卫生。

储存条件:常温运输及保存,有效期一年。

使用方法:

1. 65℃预热溶液A,待其沉淀溶化后,充分混匀,取0.75mL 加入到10-15mL的塑料离心管中并放置于65℃待用。

2. 称取20mg左右的中草药,先剪成或研磨成微小的碎片,然后转移到预热的溶液A中匀浆,匀浆过程中将产生大量泡沫,属于正常现象。也可以液氮研磨后将中草药粉末加入到预热的溶液A(建议不要在陶器或玻璃研钵中研磨,因为其主要成分二氧化硅会非特异地吸附DNA,降低DNA 回收量。但可以在塑料研钵中研磨)

3. 将匀浆液置于65℃水浴保温5分钟,然后全部转移到新的1.5mL塑料离心管中(此时匀浆液较为粘稠,可将枪头剪去一截后转移上清,植物碎片可倒入)

4. 1200015000g室温离心3分钟,将上清转移到新的1.5mL塑料离心管中(上清液的体积一般为200-700μl,如果体积超过700μl,多余部分可以不要)。有的上清液中会有少量细小块状物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处理。

5.在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀(溶液将呈白色混浊状),然后置冰浴中5分钟。

6. 1200015000g室温离心3分钟,转移上清到新离心管中。

7. 加入0.2mL的氯仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。

8. 1200015000g室温离心3分钟,两相交界面将有白色膜状物。小心转移上清到新离心管中。

9. 重复氯仿抽提步骤一次,此步可以有效去除含色素物质。

10. 加入0.6-1倍体积的异丙醇(自备),上下颠倒30秒混匀。

11. 1200015000g离心5分钟,弃上清,管底将有微小DNA沉淀。

12.沉淀用75%乙醇清洗2次后,室温晾干。
13. 加入50-100μl自备缓冲液(TE)溶解沉淀。DNA 即可用于电泳,酶切和PCR等反应。如果需要测OD,则必须乙醇沉淀去除降解的RNA

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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