产品特点：

不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大，非常难提。

储存条件：常温运输，短期可以在室温放置；长期保存最好放4℃。

使用方法：

一、培养细胞预处理

用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞，离心收集后弃上清。

用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次，离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二、组织细胞预处理

用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小最好)，转移到1.5mL塑料离心管中，用于mtDNA提取。注意：最好不要使用冻存的动物组织，因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破，使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解，影响回收率。

三、血液预处理

将3～5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟，取白细胞层。

用自备PBS洗涤白细胞两次，得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

四、mtDNA提取

在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A，充分吹打分散。如果是剪碎的组织，不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

冰上放置6～8分钟。注意不要超过8分钟。

加入350μL冰浴的溶液C，温和混匀4～6次，可见白色沉淀物产生，然后放冰上放置20～25分钟。

室温12000～15000g离心10分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。

静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合，此步十分重要。

室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中的废液。

加入500μL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中废液。

注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。

重复上步1次。

室温12000～15000g离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中，加入30～50μL 65～80℃预热的DNA洗脱液，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。

室温12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即mtDNA。

由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强，如果再加30～50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于第一次洗脱的20～30%)，但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩，可以使用本公司的核酸浓缩剂。
由于DNA机械断裂，电泳时DNA可能不呈现专一的带，但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。