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产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒 | Mycobacteria DNA column extraction kit | 50次 | CS-01F99002 |
分枝杆菌属(Mycobacterium)是一类极为古老的革兰氏阳性细菌属,它具有不同于别的细菌的细胞壁结构,其靠近细胞膜的部分是其他革兰氏阳性细菌都具有的肽聚糖(peptidoglycan)层,该层通过磷酸二酯键与分枝酸-阿拉伯半乳糖-肽聚糖复合层(MAPc)共价连接。分枝酸是含70~90个碳原子的枝链脂肪酸,位于MAPc的外层,分枝杆菌因此而得名。MAPc层之外为糖化脂质层(glycolipid),它与分枝酸相连,成分主要是磷脂,占细胞壁干重的比例高达60%,所以分枝杆菌疏水性很强,不能使用革兰氏染色。分枝杆菌细胞壁还含有贯穿整个细胞壁的脂阿拉伯糖甘露聚糖(LAM),它是一种含阿拉伯糖和甘露糖的磷酸化的、不均一混合物,其末段所连接的成分的不同与细菌对巨噬细胞反应的不同密切相关。分枝杆菌细胞壁的上述特点使得用常规方法纯化其DNA非常困难。本产品就是为解决这一问题而开发的产品。
产品特点: 操作简单,客户不需要准备额外的试剂。 适用于整个分枝杆菌属。 获得的基因组DNA足够进行后续的核酸扩增或酶切处理。PCR检测灵敏度一般在10-100 CFU/mL样品。 既可以使用培养的分枝杆菌,也可以使用从痰液、精液、血液、脑脊液等样品中分离的分枝杆菌。 安全无毒,本试剂盒对人体无害,无腐蚀性和刺激性气味。 本产品只能用于科研。 自备试剂: TE缓冲液,氯仿。 使用方法: 注意:文献报道部分分枝杆菌在DNA提取过程中还有形成菌落的能力,所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待,并严格按有关要求进行消毒处理。 一、培养的分枝杆菌样品的预处理 刮取培养皿培养的分枝杆菌到0.5mL自备TE缓冲液中。 80℃放置20分钟以杀灭分枝杆菌。 3000g室温离心15分钟,弃上清。 将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组DNA提取步骤。 二、含分枝杆菌的痰液样品的预处理 将痰液样品(0.5mL~2mL)加入到干净的10mL或15mL塑料离心管中。 加2mL的自备蒸馏水,再加入100mg化痰液干粉,充分混合均匀后室温放置15~30分钟。如果痰很浓,可以延长保温时间30分钟。 3000g室温离心15分钟,弃上清。 将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组DNA提取步骤。 三、含分枝杆菌的血液样品的预处理 用自备红细胞裂解液对血液进行红细胞裂解处理(可另购本公司红细胞裂解液产品)。 将得到的白细胞沉淀放-20℃或更低温度放置10分钟。 迅速将得到的白细胞沉淀100℃加热10分钟。 重复上步的洗涤过程一次。 短暂离心半分钟。此步不要省略,否则残留的洗柱液(含乙醇)将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应。 将离心吸附柱转移到一新的离心管中,加入50μL DNA洗脱液2.0,12000~15000g室温离心半分钟,所得溶液即分枝杆菌基因组DNA。 |
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