上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
柱式病毒DNA提取试剂盒
型号:
CS-01F98999
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国产
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产品简介
柱式病毒DNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

柱式病毒DNA提取试剂盒

Virus DNA column extraction kit

50

CS-01F98999

介绍本试剂盒是在一管式病毒DNA提取试剂盒的基础上开发的、专门用于从血清(血浆)等液体样品及拭子(咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、阴道拭子等)中提取微量病毒DNA的产品。

试剂盒特点:

1. 操作简单,整个过程只需要20分钟左右,不需要额外在洗柱液中补加乙醇。

2. 灵敏度高,通过PCR 检测到的最终灵敏度可以达到30-50拷贝/mL

3. 安全无毒,不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。

4. 如果加上病毒离心富集步骤,最多可以处理1.5mL液体病毒样品。

5.PCR和荧光PCR 兼容。

6. 价廉物美,性价比远高于国外同类产品。

7.适用于各种材料,包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。

储存条件:常温运输及保存,有效期一年。

使用方法:

1. 对于液体病毒样品:在1.5mL离心管中加入0.1-0.2mL液体病毒样品。如果病毒需要富集,可以将1.5mL液体在4 24,000 g 冷冻离心60分钟,移弃1.3mL后剩下的0.2mL 用于第2 步处理。对于拭子样品:将一个拭子放入离心管中,加入1mL自备的生理盐水,振荡器上充分振荡半分钟,然后转移0.2mL 1.5mL塑料离心管中,用于第2 步处理。

2. 加入0.6mL溶液A到第一步得到的0.2mL样品中,振荡30秒混匀后室温放置10分钟。注意:溶液A4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

3. 短暂离心后将500μl溶液转移到离心吸附柱中,室温放置2分钟。

4. 12000rpm室温离心1分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。

5. 将剩余溶液短暂离心后全部转移到步骤3的离心吸附柱中,室温放置2分钟。

6. 12000rpm室温离心1分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。

7. 加入0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000 rmp室温离心1分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。

8. 12000rpm室温离心1分钟(干甩),弃含穿透液的离心管。

9. 将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free1.5mL离心管中,在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100μl DNA 洗脱液3.0,然后室温放置2分钟。

10. 12000rpm室温离心1分钟,离心管中的溶液即为病毒DNA溶液。
11. DNA样品可以直接用于PCR,也可放-20℃长期保存。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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