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分子生物学试剂 > RNA提取纯化 > 血液/组织/细胞总RNA提取试剂盒(磁珠法)
产品名称:
血液/组织/细胞总RNA提取试剂盒(磁珠法)
型号:
CS-01F98997
生产地址
国产
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产品简介
血液/组织/细胞总RNA提取试剂盒(磁珠法)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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产品名称

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规格

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血液/组织/细胞总RNA提取试剂盒(磁珠法)

Magnetic Blood/Tissue/Cell Total RNA Extraction Kit

50

CS-01F98997

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统,从各种组织、细胞、血液中分离纯化高质量总RNA。本产品可与Kingfi sher Flex96自动核酸提取仪完美契合,通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠,从而实现磁珠和核酸的转移,提高了自动化程度。整个实验过程安全、便捷,提取的总RNA纯度高,没有基因组、蛋白和其它杂质的污染。如果需要高通量自动化提取,我公司可以提供整合方案。

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统,从各种组织、细胞、血液中分离纯化高质量总RNA。本产品可与Kingfi sher Flex96自动核酸提取仪完美契合,通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠,从而实现磁珠和核酸的转移,提高了自动化程度。整个实验过程安全、便捷,提取的总RNA纯度高,没有基因组、蛋白和其它杂质的污染。如果需要高通量自动化提取,我公司可以提供整合方案。

使用本试剂盒纯化的RNA适用于RT-PCRReal Time RT-PCR、芯片分析、Northern BlotDot BlotPolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游实验。

产品特点:

·本试剂盒即可满足手工提取也可适用于多种高通量平台批量提取。

·本试剂盒所得产物满足下游各类检测实验以及NGS分析。

自备试剂:β-巯基乙醇、异丙醇、无水乙醇

选配试剂:DNase I (目录号:WH0051)10×红细胞裂解液H (目录号:WH0229)RNase-Free过滤柱CS (目录号:WH9007)

注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。)

1.操作前在裂解液RL中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1ml裂解液RL中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配,配好的裂解液RL 4℃可放置1个月,裂解液RL在储存时可能会形成沉淀,如果有沉淀出现,请加热溶解后使用。
2.第一次使用前应在去蛋白液RD与漂洗液RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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