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产品名称:
His标签蛋白纯化试剂盒(变性剂耐受)
型号:
CS-01F98995
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国产
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产品简介
His标签蛋白纯化试剂盒(变性剂耐受)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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规格

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His标签蛋白纯化试剂盒(变性剂耐受)

His-tag Protein Purification Kit (Denaturant-resistant)

10mL

CS-01F98995

本试剂盒是一种采用了新型的GoldBalb His-tag Purification Resin (变性剂耐受型)的可以兼容高浓度变性剂(8M尿素或6M盐酸胍),并能简单、快速、灵活、高效并且高特异性地在非变性或变性条件下纯化His标签蛋白的试剂盒。

使用便捷,提供了空柱管和配套试剂。试剂盒提供了His标签蛋白所需的相关试剂和亲和层析柱空柱管,为His标签蛋白的纯化带来了极大的便利。

用途广泛,非变性和变性条件都可以使用。本试剂盒不仅可以用于在非变性条件纯化His标签蛋白,也可用于在变性条件纯化His标签蛋白。本试剂盒提供了非变性和变性条件下纯化His标签蛋白所需的不同的裂解液、洗涤液和洗脱液,可以很好地满足不同实验的需要。很多情况宜优先选择非变性条件进行目的蛋白的裂解。如果发现非变性条件目的蛋白的裂解效果欠佳,但目的蛋白的表达量能达到预期时,先宜考虑调整目的蛋白的诱导表达条件,例如调整IPTG等诱导剂的浓度和诱导时的温度等。如果调整诱导条件后在非变性条件下仍然裂解效果欠佳,此时宜考虑选择变性条件进行裂解、洗涤和洗脱。

变性条件溶解性好,洗脱样品可以直接PAGE检测。试剂盒配套提供的变性裂解液、变性洗脱液和变性洗涤液中均含有8M尿素,可以有效促使蛋白变性和溶解;终洗脱下来的目的蛋白无需透析即可用于PAGE检测。终纯化获得的目的蛋白可以通过透析去除尿素后用于后续特定用途。
通常带有6个组标签的重组蛋白或带有6个以上连续组标签的重组蛋白,被称为His标签蛋白。蛋白样品溶液通过GoldBalb His-tag Purification Resin (变性剂耐受型)时,重组蛋白His标签上的组残基能特异性地结合到GoldBalb His-tag Purification Resin (变性剂耐受型)中的镍离子上,其它蛋白则不能被结合。洗涤后,His标签重组蛋白可在非变性条件下被洗脱,从而被分离纯化。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:His标签蛋白纯化试剂盒(变性剂耐受) 10mL 

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