蛋白酶抑制剂混合物片剂(无EDTA)CS-01F98985_上海莼试生物技术有限公司

一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
蛋白酶抑制剂混合物片剂(无EDTA)	Protease Inhibitor Cocktail Tablets，EDTA-free	20片\|3×20片	CS-01F98985

介绍

本制品可以保护蛋白质以免被广泛的蛋白酶降解。在短短几分钟内，不受抑制的蛋白酶水解活性即可降解您花费数天分离的蛋白质。这些方便的水溶性片剂各自含有蛋白酶抑制剂的混合物，能抑制大多数细胞类型（包括动物、植物、酵母和细菌）的蛋白酶水解活性。

本片剂不含EDTA，可抑制广泛的丝和半胱蛋白酶，但金属蛋白酶和天冬蛋白酶不受抑制，可保持金属依赖性蛋白质的稳定性和功能不受影响。利用IMAC进行的多聚His标签融合蛋白亲和纯化也得到了简化（无需透析）。

1片本制品足以抑制50ml提取溶液中的蛋白酶活性。当蛋白水解活性非常高时，应将一片用于25ml提取液中。片剂可以直接加到提取溶液中，也可制备储备溶液(25X浓度)，方法如下：

将一片本片剂溶于2ml蒸馏水或2ml的100mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)。储备溶液也可在10mM Tris buffer,pH 7.2至7.5中进行制备。储备溶液可以在2至8℃下储存1至2周，或在-15至-25℃下储存至少12周。

产品特点：

易于使用：只需将速溶片加入到您的缓冲液中即可。

完善的保护：立即保护您的蛋白质免受广泛的蛋白酶的降解。

灵活性：几乎能够保护任何组织或细胞提取物中的蛋白质，包括动物、植物、酵母、细菌或真菌。

安全性：选择对您或您周围的人没有任何风险的无毒抑制剂。
保存条件：2-8℃

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。