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产品名称:
Bradford蛋白浓度测定试剂盒(兼容去垢剂)
型号:
CS-01F98964
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国产
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产品简介
Bradford蛋白浓度测定试剂盒(兼容去垢剂)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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Bradford蛋白浓度测定试剂盒(兼容去垢剂)

Detergent Compatible Bradford Protein Assay Kit

800T

CS-01F98964

本试剂盒和常规的Bradford蛋白浓度测定试剂盒相比可以兼容一系列常见的去垢剂,和BCA法相比,能兼容高浓度的还原剂,并且检测速度极快,在检测含去垢剂样品蛋白浓度时,比BCA法更加便捷。生命科学研究中的很多蛋白样品都是含有去垢剂的,因此常规Bradford法的使用受到了很大的限制,通常只能使用可以兼容去垢剂但检测比较耗时的BCA法。如果使用本试剂盒,不仅能兼容去垢剂,而且由于能立即显色,检测速度会比BCA法快很多。当蛋白样品中同时含有一定浓度的去垢剂和还原剂时,常规的Bradford法和BCA法就都不能使用了,而本试剂盒仍然是可以检测的。

本试剂盒基于Bradford法研制而成,实现了蛋白浓度测定的快速、稳定和高灵敏度,能兼容一系列常见去垢剂,并且检测数据有很好的线性关系。本试剂盒的性能不仅优于常规的Bradford法,和BCA法比也更加快速便捷。

Bradford法的原理是考马斯亮兰(Coommassie Brilliant Blue)G-250与蛋白质的碱性和芳香族氨基酸特别是精(Arginine)在酸性介质中结合后,溶液转变为蓝色,溶液大吸收峰从465nm迁移到595nm,颜色的变化与蛋白质浓度成正比。因此,可通过检测595nm处的吸光度对溶液中蛋白质浓度进行测定。

本试剂盒标准曲线的线性关系好。常规的Bradford法的标准曲线是非线性的。本试剂盒进行了精心优化,不仅能兼容上述的去垢剂,还能确保10μl体积的样品或标准品在0.1-1.5mg/ml浓度范围内有良好的线性关系。

与测定蛋白浓度的其它方法如BCA法和Lowry相比,本试剂盒测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,尤其是还原试剂和去垢剂的影响。样品中β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)的浓度可高达1M,二硫苏糖醇(DTT)的浓度可高达5mM。同时本试剂盒还能兼容上述各种常见的去垢剂。BCA法能耐受各种常见的去垢剂,但不能耐受高浓度的还原剂。

试剂盒特点:

检测速度极快:10-20个样品只需不足10分钟即可完成,和BCA法相比大大缩短了检测时间。

检测灵敏度高:小蛋白检测量达到0.5μg
兼容去垢剂:测定蛋白浓度时不受较高浓度去垢剂的影响,可以很好地兼容1% Triton X-1001% Tween 201% SDS1% NP-401% Brij35等去垢剂。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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