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产品名称:
His标签蛋白纯化树脂(变性剂耐受型)
型号:
CS-01F98963
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国产
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产品简介
His标签蛋白纯化树脂(变性剂耐受型)现货供应,价格实惠。
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一、概述:

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His标签蛋白纯化树脂(变性剂耐受)

GoldBalb His-tag Purification Resin (Denaturant-resistant)

10ml|100ml|10×100ml

CS-01F98963

本产品是一种新型的可以兼容尿素和盐酸胍等蛋白变性剂,从而不仅可以在非变性条件下也可以在变性条件下简单、快速、高效并且高特异性地纯化His标签蛋白的纯化介质。

通常带有6个组标签的重组蛋白(6×His-tagged recombinant protein)或带有6个以上连续组标签的重组蛋白,被称为His标签蛋白。蛋白样品溶液通过GoldBalb His-tag Purification Resin (变性剂耐受型)时,重组蛋白His标签上的组残基能特异性地结合到GoldBalb His-tag Purification Resin (变性剂耐受型)中的镍离子上,其它蛋白则不能被结合。洗涤后,His标签重组蛋白可在非变性条件下或者变性条件下被洗脱,从而被分离纯化。

本产品对His标签重组蛋白的亲和力、选择性高、结合容量大,使用本产品可以获得高纯度的His标签重组蛋白,可用于简单、快速、高效地纯化细菌、哺乳动物细胞、昆虫及杆状病毒等多种表达系统中表达的His标签重组蛋白。纯化的蛋白可以用于结构和功能研究、抗体制备、蛋白与蛋白相互作用、蛋白与核酸相互作用等方面的研究。

本产品采用了一种高度交联的6%琼脂糖凝胶(Sepharose CL-6B)为基质,并使用了进一步优化的接臂和镍离子螯合技术,和目前市售的同类产品相比,非特异性蛋白结合显著降低。

本产品可以耐受8M尿素或6M盐酸胍,可用于非变形条件和变性条件下His标签蛋白的纯化。DTT-巯基乙醇等还原剂会还原螯合结合的镍离子,而EDTA/EGTA等二价离子螯合剂则会使本产品脱镍,因此在蛋白样品或者纯化过程所使用的溶液中不能含有还原剂和螯合剂。如需在还原剂如DTT/-巯基乙醇或螯合剂EDTA/EGTA存在的条件下纯化蛋白,推荐使用的耐受还原剂和螯合剂的YT616 GoldBalb His-tag Purification Resin (耐还原螯合型)

本产品已经螯合了镍离子,呈蓝绿色,凝胶的颗粒直径为45165μm。可耐受的大压力为0.025MPa,约合5.8psi。采用固定流速进行蛋白纯化时的推荐流速为0.5mL/min

本产品可以高容量、高特异性地结合His标签蛋白。大蛋白结合量约为2535mg蛋白(分子量为55kD的蛋白)/mL凝胶。实际使用时的大结合量主要取决于待纯化的His标签重组蛋白的分子量大小,分子量越大则大结合容量越大,分子量越小则大结合容量越小。但对于分子量相同的蛋白,也会因为蛋白本身特性的不同,结合的大容量也会有所不同。

本产品储存在20%乙醇中。本产品包装体积中50%为凝胶,例如10mL总体积中5mL为凝胶,5mL为液体。使用时宜把凝胶充分重悬后再吸取。
10mL包装的本产品多可纯化100200mg带有His标签的重组蛋白(分子量为55kD的蛋白),分子量更大的蛋白结合容量会更大一些。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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