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产品名称:
蛋白A纯化试剂盒(用于IgG纯化)
型号:
CS-01F98899
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产品简介
蛋白A纯化试剂盒(用于IgG纯化)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

 产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

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蛋白A纯化试剂盒(用于IgG纯化)

Protein A Beadose Kit

1

CS-01F98899

 

本试剂盒采用Protein A琼脂糖纯化树脂,用于IgG抗体的实验室规模和工业化大规模纯化。通过C端的半胱将重组蛋白A定向偶联到基质上,增加了IgG的结合载量。整个介质的生产过程中无动物性来源的成分。

背景资料:

Protein A琼脂糖纯化树脂是亲和类树脂,用于纯化和分离IgGProtein A是一种分离自的细胞壁蛋白,主要通过Fc片段与哺乳动物的IgG结合,但是不与狗lgG结合,不结合人lgMlgDIgA。重组的Protein A包含五个高亲和力结合位点(Ka=108/M)并去除了其它非主要结合域以降低非特异性结合。ProteinA琼脂糖纯化树脂是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质,可以在相对较高的流速下进行单克隆抗体和多克隆抗体的纯化。目前Protein A纯化树脂已经广泛用于从生物流体和细胞培养液中分离和纯化各种类型的IgG或者IgG片段。由于Protein AIgG的结合只有Fc片段参与,所以不影响Fab片段与抗原的结合,Protein A琼脂糖纯化树脂有较高的耐受性,可以通过免疫沉淀来分离蛋白质复合物。

产品特点:

IgG结合能力高

具有比Protein G纯化树脂更温和的洗脱条件
树脂可重复使用10次,结合能力无明显损失。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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