操作方法:

1、组织总蛋白的提取

(1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀，放置在冰上备用;

(2)称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作;

(3)将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中，4℃12000g离心30min;

(4)吸取上清至新的管中;

(5)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。

(提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)

2、细胞总蛋白的提取

裂解液的用量：107个细胞需要裂解液1ml;

贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞，

将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20-30min

悬浮细胞：4℃400g离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，

涡旋10s，放置冰上裂解10min，重复3-4次;

裂解完毕之后，将细胞裂解液4℃12000g离心30min;

将上清移入新的EP管中;

进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。

(提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)

注意事项：

实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境;

PSMF(有毒)现用现加，因为PMSF在水溶液中会快速降解;
储存条件 ：-20℃