牛饱和铁转铁蛋白CS-01F98235_上海莼试生物技术有限公司

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一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
牛饱和铁转铁蛋白	Bovine Transferrin, HOLO	100mg\|1g	CS-01F98235

和铁转铁蛋白（holo transferrin）持续地释放铁离子，并形成脱铁转铁蛋白(apo transferrin)。研究表明，饱和铁形态的转铁蛋白对于促进细胞生长是有效的形态。对于杂交瘤，黏连细胞和悬浮细胞系，在细胞培养过程中，应保持培养基中转铁蛋白浓度在0.5-100μg/ml。针对不同的细胞系，需要选择合适的浓度。

Bovine Transferrin（牛转铁蛋白）是一种广泛使用的生物可利用铁来源，细胞和组织培养中重要的促生长营养物。采用新西兰来源的牛血浆，利用亲和色谱层析技术制备而得，保证了产品的高纯度、蛋白完整性、无辛酸残留及提取过程无热或溶剂引起的变性效应，符合ISO质量体系，确保了高质素的产品安全标准。

Bovine Transferrin（牛转铁蛋白）以高纯度、热处理、冻干粉状态提供，并有脱铁（apo）或饱和铁（holo）两种形式。

转铁蛋白冻干粉需要保存在冷藏状态下，使用之前再溶解。一般用PBS或者纯水在室温下将转铁蛋白冻干粉溶解成储液，浓度为2 mg/ml，然后用无菌滤膜进行过滤，滤液可在无菌条件下4℃保存5-10天。

英文别名：Serum transferrin; beta-1-Metal-combining protein; Siderophilin

来源：牛血浆

含铁量：不少于1000 ppm

分子量：约76,000-81,000

外观：浅红色冻干粉

纯度：≥95%（w/w总蛋白）

溶解性：溶于水（10 mg/ml），在20-25℃完全溶解约20min
储存条件：4℃

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签：牛饱和铁转铁蛋白 100mg 1g

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