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产品名称:
重组人胰岛素
型号:
CS-01F98233
生产地址
国产
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产品简介
重组人胰岛素现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性: 

产品名称

英文名称

规格

货号

重组人胰岛素

Insulin, human recombinant

25mg|100mg|500mg

CS-01F98233

本品为基因重组技术制备的全长序列的人胰岛素,分子量大约为5800 Da,结构与天然来源的人胰岛素相同,常用作细胞培养的辅助成分,常见使用浓度为1-10 μg/ml

胰岛素(insulin)是中胰岛β细胞分泌的一种双链形式(α, β)的多肽激素,由51个氨基酸组成,其中α链包含21个氨基酸,β链包含30个氨基酸。两条链间通过二对二硫键连接,而α链自身还含有一对二硫键。胰岛素的分泌过程是:前胰岛素原的氨基末端携带有一段23-30氨基酸的信号肽,该信号肽可将前胰岛素原转移至内质网,然后立即被切断,释放出胰岛素原。胰岛素原由胰岛素β链、C-肽和α链组成,释放出的胰岛素原随即被转至高尔基体,在此被包装并转化成胰岛素,与C-肽一同释放至血液。

胰岛素是目前已知的机体内能降低血糖的蛋白激素,不仅负责调控细胞对葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的摄入,利用和储存,而且抑制糖原,蛋白质和脂肪的降解发生。不同物种胰岛素功能大体相同,只是氨基酸组成上的差异。

来源:大肠杆菌

CAS11061-68-0

分子式:C257H383N65O77S6

分子量:5807.57

外观:白色精细粉末

活性(Potency):≥27.5 USP U/mg

纯度:95%-105%

锌含量(Zinc Amount ):≤1.0%(若实验要求去除锌离子,可将胰岛素溶解在稀醋酸内,加入过量EDTA螯合锌离子,然后等电点沉淀纯化胰岛素)

溶解性:不溶于中性pH水,溶于稀醋酸或稀盐酸(pH 2-3

等电点(pI):pl = 5.3(天然蛋白)

序列:A-Chain: G-I-V-E-Q-C-C-T-S-I-C-S-L-Y-Q-L-E-N-Y-C-N

B-Chain: F-V-N-Q-H-L-C-G-S-H-L-V-E-A-L-Y-L-V-C-G-E-R-G-F-F-Y-T-P-K-T
储存条件:-20℃干燥

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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